Hans Journal of Biomedicine
Vol.06 No.02(2016), Article ID:17698,10 pages
10.12677/HJBM.2016.62002

Hydrogen Sulfide Confers Cardioprotection through Anti-Apoptotic Effect in Acute Viral Myocarditis

Cuiping Yang*, Fei Zhong, Shuangjie Li, Zuo Wang

College of Medical, Jishou University, Jishou Hunan

Received: May 10th, 2016; accepted: May 27th, 2016; published: May 30th, 2016

Copyright © 2016 by authors and Hans Publishers Inc.

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ABSTRACT

Objective: To explore the cardiomyocytes anti-apoptosis effect of Hydrogen Sulfide (H2S) on CVB3- induced Acute Viral Myocarditis (AVMC) Balb/c mice. Methods: 50 male 4 - 5-week-old Balb/c mice were randomly divided into three groups, including group N (control group, n = 10), group C (CVB3 virus control group, n = 20), and group H (NaHS treatment group, n = 20). Mice in groups C and H were repeatedly inoculated with 0.2 mL 1640 medium containing Coxsackie Virus B3 (CVB3) to build VMC model; at the same time, mice in group H were intraperitoneally injected with 50 mol/kg NaHS; and mice in group H were received intraperitoneal injection of the same amount of normal saline, 1 time/d, for 7 consecutive days. We observed and recorded the symptoms and the survival situation of mice in each group within 7 days, counted the number of live mice at different time points and did analysis about survival rate of each group. We removed dead mice’s hearts after 7 days, weighed them, calculated the HM/BM, observed the pathology change of myocardial cells, calculated myocardial histopathologic score through HE staining, and detected the myocardial apoptosis by TUNEL, and the expression of p53, Bax, Bcl-2, caspase-3 related to apoptotic by Western Blot. Results: Compared with group N, the expression of p53 protein, and Bax protein in group C significantly increased; the expression of caspase-3 protein activity significantly increased; the expression of Bcl-2 protein reduced (p < 0.05). After injecting NaHS to group H, compared with group C, the expression of p53 protein reduced; the expression of Bax protein reduced; the expression of Bcl-2 protein was significantly higher than group C; the expression of caspase-3 protein activity significantly reduced (p < 0.05). Conclusion: These observations suggest that NaHS confers cardioprotection through increasing the survival rate of mice, reducing myocardial pathological scores and myocardial cell apoptosis, and regulating the apoptosis-related proteins p53, Bax, Bcl-2, caspase-3, and inhibition of cardiomyocyte apoptosis effect in acute viral myocarditis.

Keywords:Hydrogen Sulfide, Actue Viral Myocarditis, Apoptosis

硫化氢对急性病毒性心肌炎小鼠心肌细胞凋亡的保护作用

杨翠平*,钟飞,李双杰,王佐

吉首大学医学院,湖南 吉首

收稿日期:2016年5月10日;录用日期:2016年5月27日;发布日期:2016年5月30日

摘 要

目的:探讨硫化氢(H2S)对CVB3诱导的急性病毒性心肌炎(Acute Viral Myocarditis, AVMC) Balb/c小鼠心肌细胞抗凋亡的保护作用。方法:将50只4周龄雄性Balb/c小鼠随机分为正常对照组(N组)、病毒感染组(C组)、硫化氢治疗组(H组),C、H组小鼠腹腔反复接种0.2 mL内含柯萨奇病毒B3(CVB3)的1640培养液建立VMC模型,H组病毒感染同时腹腔注射50 μmol/kg NaHS,N组腹腔无菌注射等量生理盐水,1次/d,连续7天。动态观察记录实验期间各组小鼠一般情况,各组小鼠死亡数,绘制生存曲线进行生存分析;各组小鼠于第7天全部处死称重(BM),取心脏称重(HM),计算HM/BM;心肌HE染色后光镜下观察心肌病理改变并计算心肌病理积分;TUNEI法检测心肌细胞凋亡情况并计算心肌凋亡指数;Western Blot 法检测心肌细胞凋亡相关蛋白p53、Bax、Bcl-2、caspase-3的表达情况。结果:与N组相比,C组HM/BM比值增大、心肌病理积分较对照组明显增加,促凋亡蛋白p53、Bax表达水平增加,抑凋亡蛋白Bcl-2表达水平下降,caspase-3表达活性显著增加(p < 0.05)。在NaHS治疗后,H组与C组相比,H组的心肌病理积分明显降低,促凋亡蛋白p53、Bax表达水平明显下调,抑凋亡蛋白Bcl-2表达水平上调,caspase-3活性明显降低(p < 0.05)。结论:NaHS可提高VMC小鼠的存活率、降低心肌病理积分、减少心肌细胞凋亡数,并通过调节凋亡相关蛋白p53、Bax、Bcl-2、caspase-3表达抑制心肌细胞凋亡,从而起到保护VMC小鼠心肌的作用。

关键词 :硫化氢,急性病毒性心肌炎,细胞凋亡

1. 引言

病毒性心肌炎(VMC)是由病毒直接感染心肌后,导致心肌实质或间质的局限性或弥漫性炎症损伤的一种常见的心血管疾病。诱发VMC发生的病毒已知有流感病毒、风疹病毒、肠道病毒等二十余种,其中主要以肠道病毒柯萨奇B组病毒(CVB3)致病力最强 [1] 。近年来据国内外统计其发病率均有日益增多的趋势,且目前各种原因引起的心肌炎中,因病毒CVB3感染引起的发病率最高,60%的心肌炎患者通过心内膜穿刺细胞病毒检测为阳性 [2] ,且因CVB3与小儿心肌有特异的亲和力,也成为婴幼儿及小儿时期常见的心脏病之一,临床上治疗效果不佳或容易复发或预后欠佳,并能进一步发展为扩张型心肌病(DMC)和充血性心脏衰竭(CHF) [3] - [5] ,严重危害到小儿的生命健康。目前研究大多数认为VMC发病机制与病毒直接侵犯心脏以及病毒感染引起机体的自身免疫反应有关之外,但有研究发现在CVB3病毒感染balb/c小鼠心肌炎的急性期,直接入侵心肌细胞,在心肌病灶周围有心肌细胞凋亡现象,在亚急性期逐渐增多,到扩张型心肌病期,心肌细胞凋亡呈散在分布,这表明心肌细胞凋亡在VMC发生发展过程中发挥着十分重要作用 [6] [7] 。近年来,无色、具有臭鸡蛋气味的有毒气体硫化氢(H2S)的生理作用逐渐被人关注,其被认为是一种新型的神经调节因子和传递因子,在生物体内,硫化氢可通过一系列酶促反应或非酶促反应途径产生,广泛参与了心血管、神经等多种组织和器官的病理和生理过程 [8] 。其抗氧化、抗炎症、抗凋亡等生物学效应在许多神经、心血管、肝肾等疾病模型研究中得到证实,特别是其在心肌细胞中的抗炎症损伤及凋亡的细胞保护作用受到越来越多的关注 [9] 。有研究发现,心肌组织能由CSE酶催化后生成硫化氢,CVB3感染后可诱导心肌CSE/H2S通路上调,H2S对病毒性心肌炎的发生发展过程中多个环节有着十分重要的影响 [10] 。另有研究表明在急性缺血性心肌病中,外源性硫化氢可通过上调Bcl-2表达,下调Bax表达,抑制心肌细胞凋亡,发挥其保护心肌细胞的作用 [11] 。但是关于硫化氢对CVB3感染所致的VMC心肌细胞凋亡的保护作用研究甚少,因此,本实验利用CVB3感染Balb/c小鼠复制VMC动物模型,以H2S供体硫氢化钠(sodium hydrosulfide, NaHS)对急性病毒性心肌炎小鼠进行干预治疗,通过观察NaHS对VMC小鼠一般情况、生存率以及心肌细胞凋亡等相关指标的影响,以探讨H2S对VMC小鼠心肌细胞凋亡的保护作用。

2. 材料

2.1. 实验动物

50只4~5周龄近交系纯种雄性Balb/C小鼠,体重13~15 g。二级实验动物,购于湖南长沙斯莱克实验动物有限公司,南华大学动物实验室,SPF级,许可证号为SCXK(湘)2011-0003,鼠粮:为清洁级小鼠生长繁殖颗粒饲料,动物的饲养符合中国动物保护法所有实验动物均受到人道对待,符合美国国立卫生研究院颁布的“实验动物管理和使用指南”。柯萨奇B3 Nancy株病毒由上海复旦大学附属中山医院病毒性心脏病重点实验室陈瑞珍教授惠赠,−80℃冰箱保存备用。

2.2. 实验药物与试剂

柯萨奇B3 Nancy株病毒由上海复旦大学附属中山医院病毒性心脏病重点实验室杨英珍教授惠赠,−80℃冰箱保存备用。NaHS购自Sigma公司,生理盐水稀释,剂量50 μmol/(kg·d) [12] ,根据小鼠体重确定最后所需溶液的体积。抗体购于proterntech公司,SDS-PAGE凝胶配置试剂盒/BCA蛋白浓度测定试剂盒等购于碧云天试剂有限公司。

2.3. 实验动物分组、模型复制及药物干预

根据预实验结果,将50只Balb/c小鼠,随机分为N组(正常对照组,n = 10)、C组(CVB3病毒组,n = 20)、H组(NaHS治疗组,n = 20),N组正常对照组腹腔注射0.3 ml不含CVB3的1640培养液,C、H组均腹腔注射0.3 ml内含CVB3的1640培养液复制VMC小鼠模型,H组病毒感染同时给予NaHS 50 μmol/(kg·d)腹腔注射,每日1次,疗程7天;

3. 方法

3.1. 一般情况及标本处理

实验期间,每天观察动物的进食进水量及体重情况,观察动物活动力,粪便情况,观察毛发,神经系统,循环系统,呼吸系统等情况,每个观察的终末记录小鼠死亡情况,死亡鼠解剖检查心脏病变。7天后处死全部小鼠,无菌摘取心脏称重(Heart Mass, HM),计算HM/BM,将心脏按左室中线切为两半,一半用10%中性福尔马林溶液固定,石蜡包埋、切片,用于HE染色;另一半迅速放入液氮,然后保存于−80℃冰箱,用于蛋白提取。

3.2. HE染色评估心肌病理变化

小鼠心脏10%中兴福尔马林固定后,心肌组织进行常规脱水,石蜡包埋,切片,HE染色后镜检。在光镜下观察组织切片心肌细胞损伤、炎性细胞浸润、心肌纤维化等炎症病变程度,并参照Rezkalla方法 [13] 计算心肌病理组织学积分计算心肌病变积分,即每张切片取5个视野,计算每个视野中炎性细胞浸润及坏死区域面积与整个视野面积之比,无病变计0分,<25%计1分,25%~50%计2分,50%~75%计3分,>75%计4分。

3.3. 原位末端标记(TdT-Mediated dUTP Nick End Labe-Ling, TUNEL)法测定凋亡

取出心脏,心肌组织放入4%多聚甲醛固定,常规石蜡包埋、切片,按ROCHE公司TUNEL检测试剂盒说明书操作。每个石蜡块取6个切片,每张切片随机选取6个视野摄片,计数凋亡细胞数和细胞总数,图像用Image Pro Plus 6.0软件分析。凋亡细胞定量计数单位以凋亡指数表示,公式为:凋亡指数 = 凋亡细胞数/总观察细胞数 × 100%。

3.4. Western Blot法测定凋亡相关蛋白p53、Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达

取病毒性心肌炎小鼠心肌组织标本液氮研碎,加入裂解液,经匀浆离心后,取上清液用BCA法测定蛋白浓度,变性后−20℃保存。取各组样品50 μg,进行12% SDS-PAGE并电转移至 PVDF膜上,用5%脱脂奶粉室温摇床封闭2 h后,加入一抗稀释液稀释的抗体(不同抗体不同稀释比例),4℃冰箱中孵育过夜,用TBST洗涤5 min × 3次。然后加入二抗(1:1000稀释),室温下摇床孵育2 h后,用TBST洗涤5 min × 5次。ECL发光液显色,胶片扫描后用Image J软件进行图像分析,以β-actin (1:1000稀释)作为内参照对比,比值结果表示其蛋白的相对含量。

3.5. 统计学处理

采用SPSS 16.0软件进行统计学处理。计量资料以均数 ± 标准差(x ± s)表示,在正态分布且方差齐的情况下对其行单因素方差分析,两两比较采用LSD法,p < 0.05为差异有统计学意义。

4. 结果

4.1. 硫化氢对VMC小鼠体重、HM/BM、生存率的影响

实验期间N组小鼠均活动自如,体重逐渐加重,无1例自然死亡,生存率为100%;接种CVB3病毒感染后,C组小鼠体重急剧下降,感染后第3天出现饮食减少,懒动,耸毛,随后症状加重,第4天开始出现死亡,体重骤减,到第7天共死亡16只,存活率4/20 (20%);NaHS干预治疗后,与C组比较,H组体重有所增加,小鼠一般情况良好,部分小鼠感染后第3天出现食欲不佳,体重减轻,少动倦怠,到第7天死亡7只,存活率为13/20 (65%),H组生存率明显高于C治疗组(p < 0.05)。另外,C组HM/BM比值明显增大,与C组比较,H组HM/BM比值减小,差异有统计学意义(p < 0.05) (见图1~3)。

4.2. 硫化氢对小鼠心肌病理改变的影响

接种病毒后,心脏表观观察,N组小鼠为正常心肌,未见病理改变;C组小鼠在病毒接种后第3天

Figure 1. Changes in body weight of mice in each group

图1. 各组小鼠体重变化

Figure 2. Comparing HM/BM of mice in each group

图2. 各组小鼠HM/BM比较

Figure 3. The cumulative survival rate of mice in each group. The blue line represents the normal control group (N, n = 10); the green line represents the viral infection group (C, n = 20); yellow line represents hydrogen sulfide treatment group (H, n = 20); group C mice survival rate was significantly lower in N group (p < 0.05); H mice survival rate compared with group C, the survival rate significantly increased (p < 0.05)

图3. 各组小鼠生存情况。蓝色线代表正常对照组(N, n = 10);绿色线代表病毒感染组(C, n = 20);黄色线代表硫化氢治疗组(H, n = 20);C组小鼠生存率明显低于N组(p < 0.05);H组小鼠生存率与C组比较,生存率明显提高(p < 0.05)

可见部分小鼠心肌外膜可见部分点状白色渗出点,感染后第5~7天病变加重,可见心肌外膜出现广泛黄白色絮状斑块、斑点状渗出,心外膜下淤血;与C组相比,H组小鼠心脏表观病变轻,心外膜未见黄白色渗出物。光镜下观察,感染CVB3后第3天,各组小鼠心肌均未见明显病理改变,感染后第5~7天C组小鼠心脏可见心肌纤维排列紊乱,心肌细胞出现浑浊肿胀,间质内有炎性细胞浸润,第7天可见心肌纤维断裂,维排列紊乱,间隙增宽,可见广泛的炎性细胞浸润,甚至出现心肌坏死病灶,心肌病理积分比正常对照组明显增高(p < 0.05)。H治疗组小鼠病毒感染后第5~7天出现轻微病理改变,心肌纤维排列尚可,结构清晰,间质细胞轻度水肿,可见少量炎性细浸润,部分小鼠心肌纤维排列增宽紊乱,间质可见淋巴细胞浸润,少量心肌细胞坏死,心肌病理积分较同期C组明显降低(p < 0.05) (见图4表1)。

4.3. 硫化氢对病毒性心肌炎小鼠心肌细胞凋亡的影响

经原位末端标记标记后,显微镜下观察,N组切片中检测到阴性细胞核染色呈蓝色,C组切片中阳性细胞核染色呈棕褐色,细胞核体积缩小或明显皱缩,形态多呈圆形。C组切片心肌组织中可见大量阳性细胞核,H组切片中仅见少量阳性细胞核。通过计算凋亡指数发现,N组小鼠心肌细胞凋亡数量很少,凋亡率约为(0.4 ± 0.2)%;C组切片心肌组织中可见大量阳性细胞核,凋亡指数明显增加达(58.9 ± 12.1)%,H组切片中阳性细胞核较少,凋亡指数约为(32.9 ± 6.5)%,两两比较,C组较N组心肌细胞凋亡指数明显升高,差异具有统计学差异(p < 0.05),H组心肌细胞凋亡指数明显低于C组,差异显著有统计学意义(p < 0.05)。见图5表2

4.4. 硫化氢对VMC小鼠心肌组织凋亡相关蛋白p53、Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达的影响

根据Westerm blot结果显示,N组小鼠心肌细胞中未见p53蛋白表达,有少量Bcl-2、Bax蛋白表达;CVB3感染后,与N组比较,C组p53蛋白的表达水平显著高于N组(p < 0.05),Bcl-2蛋白表达下降(p < 0.05) Bax的表达显著增加,Bcl-2/Bax比值减小,caspase-3蛋白活性增强,差异有显著统计学意(p < 0.01);硫化氢干预治疗后,与C组相比,H组p53蛋白的表达水平显著降低,心肌组织中抑凋亡Bcl-2蛋白表达明显增加,Bax蛋白表达明显降低,Bcl-2/Bax比值增大,caspase-3蛋白活性降低,两组比较差异有显著统计学意义(p < 0.05) (见图6)。

5. 讨论

硫化氢(Hydrogen Sulfide, H2S)是近年来引人瞩目的新型气体信号分子,其生物学功能类似于一氧化氮和一氧化碳,现作为第三种气体信号分子广泛用于各种神经系统、消化系统、心血管系统疾病研究中,特别是其对心肌的保护作用近年来备受关注 [14] 。NaSH是一种硫化氢供体,其性能较稳定,具有抗炎症、抗凋亡、抗氧化等多种生物学效应 [15] - [17] 。同时硫化氢作为一种新的拮抗心脏损伤的保护气体信号分子,当心肌缺血、再灌注、病毒刺激时,可通过抗炎症、抗凋亡、抗氧化等机制发挥重要的心肌保护作用 [18] 。在急性心肌缺血模型中,NaHS通过抑制炎症反应以及抗心肌细胞凋亡作用,调控心肌细胞凋亡信号通路,发挥其保护心肌的作用 [19] 。同时在CVB3感染所致VMC的心肌细胞模型研究中发现,心肌组织内源性硫化氢在体内能抑制柯萨奇病毒CVB3在心肌细胞内复制 [20] ,在体外实验研究中证实NaHS可通过减少自由基损伤及抑制炎症因子释放,起到对VMC小鼠心肌细胞损伤的心肌保护作用 [21] 。

近年来大量研究表明,细胞凋亡在病毒性心肌炎发生发展过程中起着十分关键的作用,被认为是继病毒直接损伤、自身免疫间接损伤发病机制之后的第三种发病机制 [22] 。细胞凋亡作为机体内细胞的一种主动程序性死亡方式,受许多因素的影响,而细胞凋亡主要受机体内一些凋亡相关基因调控,细胞凋亡的发生是细胞内促凋亡蛋白与抑凋亡蛋白之间的动态平衡丧失的结果,其中Bcl-2家族及p53蛋白等在

Figure 4. Myocardial pathological changes in each group of mice. N represents the normal control group; C on behalf of the virus infection group; H on behalf of hydrogen sulfide treatment group; compared with N, group C disordered myocardial fibers, inflammatory cell infiltration, apoptosis and necrosis appear; H compared with group C, H myocardial fibers arranged in neat rows, only a small amount of inflammatory cell infiltration, no myocardial necrosis lesions

图4. 各组小鼠心肌病理改变。N代表正常对照组;C代表病毒感染组;H代表硫化氢治疗组;与N组比较,C组心肌纤维排列紊乱,大量炎性细胞浸润,出现细胞凋亡坏死;H与C组相比较,H心肌纤维排列整齐,仅少量炎性细胞浸润,心肌未见坏死病灶

Figure 5. Comparing myocardial apoptosis in each group of mice (TUNEL*200). N represents the normal control group; C on behalf of the virus infection group; H on behalf of hydrogen sulfide treatment group; compared with N, the number of apoptotic cells in mice significantly increased in group C (p < 0.05); compared with C, H group therapy significantly reduced cardiac myocyte apoptosis (p < 0.05)

图5. 各组小鼠心肌细胞凋亡比较(TUNEL*200)。N代表正常对照组;C代表病毒感染组;H代表硫化氢治疗组,C组小鼠细胞凋亡数明显增多(p < 0.05);与C相比,H治疗组心肌细胞凋亡数明显减少(p < 0.05)

Table 1. Myocardial pathological scores at different time points in each group of mice

表1. 各组小鼠不同时间点心肌病理积分

N代表正常对照组;C代表病毒感染组;H代表硫化氢治疗组,与H组相比较,C组病理积分明显高于H组(p < 0.01)

Table 2. Comparing myocardial apoptosis index of mice in each group (%, x ± s)

表2. 各组小鼠心肌凋亡指数比较(%, x ± s)

C组较N组心肌细胞凋亡指数明显升高,差异具有统计学差异(p < 0.05),H组心肌细胞凋亡指数明显低于C组,差异显著有统计学意义(p < 0.05)

Figure 6. Comparing myocardial the expression of apoptosis-related protein. N represents the normal control group; C on behalf of the virus infection group; H on behalf of hydrogen sulfide treatment group; compared with N, H group compared with group C, the expression of Bcl-2 protein was significantly increased, the expression of Bax protein was significantly reduced, Bcl-2/Bax ratio was significantly increased, the expression of caspase-3 protein were significantly lower, the difference was statistically significant (p < 0.01)

图6. 各组小鼠心肌凋亡相关蛋白表达比较。N代表正常对照组,C代表病毒感染组,H代表硫化氢治疗组。H组与C组比较,Bcl-2蛋白表达明显升高,Bax蛋白表达明显降低,Bcl-2/Bax比值明显增大,caspase-3蛋白表达均明显降低,两组比较差异有显著统计学意(p < 0.01)

凋亡中起着十分重要的作用。病毒感染心肌细胞,同时引起机体激活凋亡程序即通过清除感染细胞、保护心肌正常细胞达到清除病毒的防御作用,同时机体通过激活凋亡相关基因或增加抗凋亡基因表达,调控心肌细胞的凋亡来实现保护正常心肌的存活和繁殖 [23] 。Bcl-2家族中具有促凋亡作用的Bax和抑制凋亡蛋白Bcl-2参与对细胞凋亡过程的调控。已有研究表明Bax、Bcl-2参与CVB3诱导的心肌炎小鼠心肌细胞浸润和细胞凋亡过程 [24] 。同时作为凋亡组织者的p53蛋白,作为一种特殊的转录因子参与对凋亡相关蛋白活性的转录调控。对细胞凋亡的调控可通过调控其下游凋亡相关蛋白的表达来实现,在细胞凋亡过程中发挥着至关重要的作用。有研究发现p53在CVB3反复感染诱导的病毒性扩张型心肌病动物模型急性期表达显著上升,这表明p53参与病毒性心肌炎的发生发展过程 [25] 。这是否表明p53、Bcl-2/Bax等凋亡相关蛋白的表达及相互作用决定了细胞的存活与死亡。另外caspase-3是一种与细胞凋亡密切相关的蛋白酶类,作为细胞程序性死亡的感受器和效应器,是caspase家族级联“下游”基因,是对细胞的凋亡起着最关键作用的启动子和执行蛋白酶,在各种细胞程序性死亡中发挥着最终枢纽作用 [26] [27] 。

在本实验研究通过采用NaHS干预治疗急性病毒性心肌炎,结果显示:通过生存曲线分析可知H组小鼠存活率为13/20 (65%)明显高于C组存活率4/20 (20%);各组小鼠心肌经HE染色,光镜下观察,与C组相比较,硫化氢能明显改善病毒性心肌炎的心肌炎性浸润坏死,H组心肌病理积分显著低于C组(p < 0.01);TUNEL检测结果表明:C组心肌细胞凋亡数量较N组相比明显增加,而H组心肌组织细胞凋亡指数明显下降。当CVB3感染心肌,机体自身激活细胞凋亡程序,同时病毒也通过调控凋亡相关蛋白的表达来调控心肌细胞的凋亡。通过进一步分子生物学研究发现,C组小鼠心肌组织Bcl-2表达受抑制,Bax、p53、caspase-3蛋白的表达增加;H组Bcl-2比值与C组相比较明显升高,而Bax、p53、caspase-3蛋白的表达明显降低,Bcl-2/Bax比值增大。综上所述,本实验研究结果表明外源性硫化氢可通过改善急性病毒性心肌炎心肌病理改变,下调心肌细胞凋亡蛋白p53、caspase-3表达,增大Bcl-2/Bax比值,减少心肌细胞的凋亡,从而起到对CVB3诱导的急性病毒性心肌炎小鼠起到一定的心肌保护作用。

总之,外源性硫化氢可能通过提高CVB3诱导的急性病毒性心肌炎小鼠的生存率,改善心肌病理改变及减少心肌细胞凋亡数,下调心肌细胞促凋亡蛋白Bax、p53表达,上调抑凋亡蛋白Bcl-2,增大Bcl-2/ Bax比值,降低caspase-3的活性,减少心肌细胞的凋亡,从而起到保护急性病毒性心肌炎小鼠心肌的作用;p53及Bcl-2/Bax在急性病毒性心肌炎的发生发展过程中发挥着重要作用。因此,硫化氢作为一种新的气体信号分子有望在病毒性心肌病中开拓一条新的治疗途径。但本实验研究还存在一些问题,如对心肌细胞凋亡凋亡检测上还有一定缺陷,没有采用定量PCR技术对凋亡相关因子进行mRNA水平的检测,更快更准确检测硫化氢对急性病毒性心肌炎心肌组织凋亡水平的影响。另外对VMC小鼠心肌细胞凋亡其他相关蛋白是否有影响以及具体作用机制尚不十分清楚,有待进一步研究。

基金项目

国家自然基金课题(2013年)项目编号81341095,氢盐水治疗病毒性心肌病对P53泛素化通路调控细胞凋亡的研究。

文章引用

杨翠平,钟 飞,李双杰,王 佐. 硫化氢对急性病毒性心肌炎小鼠心肌细胞凋亡的保护作用
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*通讯作者。

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