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1. 引言

犬细小病毒病是由犬细小病毒引起的，可感染犬、猫、貂、狐狸等犬科和鼠鼬科动物，以幼犬最易感。在接触病犬的粪便时，感染的机率会增大，因为病毒在粪便中可以存活很长时间。外界环境的骤变也会促进本病的发生，例如机体的防御机制下降，肠道内的菌群毒力增强等，导致细菌或者病毒极易侵害机体，可使犬发生严重的肠炎综合征(以剧烈呕吐、血样腹泻、严重脱水等为特征)和心肌炎综合征(以突然死亡的非化脓性心肌炎为特征)^[1]。

CPV基因组是一条单股负链线性的DNA，是自主复制的病毒，含有5323个氨基酸，无囊膜，是DNA病毒中分子量最小的病毒。病毒的核衣壳为对称的20面体^[2]，分子量1.4 × 10⁶~1.7 × 10⁶。CPV的核衣壳由结构蛋白VP1和VP2交错构成，VP2是衣壳蛋白的主要组成部分，在病毒中起到重要的作用，能够识别宿主细胞受体，决定病毒组织嗜性的功能^[3]。

犬细小病毒的发病率和死亡率都极高，治疗效果不是很明显，疫苗免疫就成为本病预防的根本措施，但也会出现免疫失败，与疫苗的质量有关，也与免疫干扰有关系，选取的疫苗应避免母源抗体干扰，品质越高的疫苗免疫效果越好^[4]。本文概述了犬细小病毒病疫苗的研究现状，为犬细小病毒病的预防提供参考。

2. 灭活疫苗

灭活苗是使用灭活的病毒接种动物，具有免疫效果确实，免疫持续期长，生产成本较低等特点。1982年，Pollock和Carmichael报道了犬源灭活苗预防犬细小病毒感染的报告，研究指出，血清HI效价超过1:80的犬即可抵抗CPV感染。在攻毒试验中发现，CPV灭活苗一次免疫后，HI效价在1:40以上，二次免疫后多在1:80以上，口服攻击强毒后均无临床症状和排毒现象。20周后，免疫犬抗体水平仍在l:80以上。因此，CPV灭活苗在临床应用时应间隔两周进行重复注苗^[5]。1990年，徐汉坤等以分离自南京病犬的犬细小病毒株，研制成细小病毒细胞培养灭活疫苗用于免疫试验，发现CPV灭活苗免疫后无不良反应和排毒现象，安全可靠。虽然灭活的强毒对动物可以起到一定的保护力，但对于已经感染的犬不能阻止排毒，也就是说病毒的传播仍然无法预防，病毒仍然会感染动物^[6]。

3. 弱毒疫苗

CPV弱毒疫苗接种实验动物后产生免疫应答，需要多次免疫才能使机体产生达到高滴度的保护性抗体^[7]。Pratelli等研究发现，对幼犬接种CPV-2b的变种疫苗，疫苗可以克服母源抗体的干扰，抗体滴度比较高，抗体滴度达到1:10~1:40的比例为100%，抗体滴度达到1:80的比例为83%，抗体滴度达到1:160的比例57%^[8]。中国军事兽医研究所犬病研究组从貂体内分离获得一株细小病毒株，此毒株大剂量接种对犬安全，遗传性稳定，能克服母源抗体对疫苗的干扰，目前已经大量应用于我国军犬基地的预防工作，对犬的保护作用极高^[9]。传统的弱毒疫苗虽能诱导良好的免疫应答和提供较长的免疫保护期，疫苗在生产过程中有可能没有被完全杀死或者充分致弱，具有散毒和毒力返强的危险，其使用受到一定的限制^[10]。

4. 基因工程亚单位疫苗

运用DNA重组技术使编码病原微生物保护性抗原的基因在原核或真核细胞中高效表达，提取保护性抗原蛋白，加入适当佐剂即制成重组亚单位疫苗。由于亚单位疫苗不含有病原体的其他遗传信息，因此具有安全性好、副作用小等优点^[11]。Lopez等^[12]在昆虫杆状病毒表达系统中表达了CPV-VP2蛋白，10 μg的表达蛋白可使犬获得良好的免疫效果；Langeveld^[13]合成的位于VP2氨基两段多肽分别免疫犬，均能产生免疫保护作用。王亚君等^[14]利用杆状病毒表达系统表达的犬细小病毒VP2蛋白具有良好的免疫原性。在无佐剂参与的情况下，用重组蛋白免疫6~8周龄的BALB/c小鼠，能诱导小鼠产生抗CPV的特异性中和抗体，且抗体产生快，可维持较高水平。但由于重组亚单位疫苗存在一些不足(产品研发费用高，价格昂贵，免疫原性通常比完整病原体差^[15]，需要多次免疫才能得到有效保护等)，需要进一步优化。

5. 核酸疫苗

核酸疫苗是继减毒疫苗、基因工程疫苗之后的第三代疫苗，不仅能够高效诱导免疫应答，而且还有明显的治疗作用。核酸疫苗是随着现代分子生物学和免疫学的发展而产生的。核酸疫苗又名基因疫苗或DNA疫苗，就是将编码某些特异性抗原的基因插入真核表达载体内，然后把重组质粒导入机体细胞中，经载体的真核启动子转录后，使外源基因得以表达，产生的抗原刺激机体免疫系统，并诱发特异性的免疫反应^[16-19]。DNA疫苗具有可同时诱导体液免疫和细胞免疫；可将含有不同抗原基因的质粒混合起来联合免疫；可在同一载体上插入多种基因；可持续表达外源蛋白；易于构建和制备；稳定性好等优点。因此，近年来在犬细小病毒病新型疫苗的研发中也显示出其独特的优势。Jiang W等^[20]将CPV的VP1基因插入真核载体构建了Pgt36VP1重组体，将此核酸疫苗免疫犬，取得了良好的免疫效果。邱薇等^[21]构建pIRESVP1重组质粒，不同剂量分别接种6只9月龄犬，每8周免疫1次，共3次。结果显示，第2次免疫后即可检测到较高的血清抗体效价。在第3次免疫4周后攻毒。所有接种pIRESVP1疫苗的犬均能抵抗CPV强毒的攻击，而接种空载体质粒和生理盐水的对照犬则全部发病。上述研究不仅证明接种所构建的重组质粒pIRESVP1能使犬免受犬细小病毒强毒的感染，而且将VP1作为犬细小病毒病基因疫苗的候选基因，具有确实的免疫效果，为随后的基因疫苗改进提供了思路。陈同海等^[22]应用pcDCPV和pIRcpvIL2重组质粒配置成疫苗，对幼貂进行免疫，结果证明免疫后的幼貂对CPV的攻击具有一定的保护作用。但核酸疫苗在安全性方面尚有许多需要探讨的问题^[23,24]。例如：局部反应原性和全身毒性；遗传毒性作用，即质粒DNA与宿主基因组整合的问题；生殖毒性；致肿瘤性；表达抗原的载体自身可能有其他生物活性；自身免疫疾病；质粒携带的抗性基因的转移等。

6. 结语

随着时间的变化，病毒的抗原性和宿主范围都在不断发生变化，常规的免疫接种可以作为一个有效的保护预防措施，但是有研究发现，在接受过免疫接种的犬，仍然有可能再次感染细小病毒，这些可能与CPV今年来不断变异有关，各种疫苗各有优劣，因此在研究预防工作的同时也要进一步监测病毒的变异和流行情况，研制出更有效更理想的疫苗。

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NOTES

^*通讯作者。