Advances in Analytical Chemistry
Vol.07 No.02(2017), Article ID:20188,7 pages
10.12677/AAC.2017.72008

Validation of Analysis Method of 3-Sulfonic Acid Methyl Ester and 3-Sulfonic Acid Ethyl Ester in Landiolol Hydrochloride

Fansheng Ning, Shanshan Wang, Lei Li, Yunliang Lin, Xiaoli Wang, Xiangfeng Chen*

Shandong Analysis and Test Centre, Jinan Shandong

Received: Mar. 26th, 2017; accepted: Apr. 13th, 2017; published: Apr. 17th, 2017

ABSTRACT

Analysis method of 3-sulfonic acid methyl ester and 3-sulfonic acid ethyl ester in Landiolol Hydrochloride were established in this work. Multiple reaction monitoring was used to reduce the interference of the matrix and increase the sensitivity of the method. The linear correlation coefficients of two target compounds were all above 0.99 in the concentration range of 0.05 µg/ml to 1 µg/ml. The recoveries of samples with two standard additions ranged from 95.0% to 110.0%. The precision (RSD%, n = 6) of the method was between 1.5% and 3.0%. The method was able to analyze 3-sulfonic acid methyl ester and 3-sulfonic acid ethyl ester in Landiolol Hydrochloride.

Keywords:Gas Chromatography Tandem Mass Spectrometry, Multiple Reaction Monitoring (MRM), Precision, Accuracy, Applicability

盐酸兰地洛尔原料药中基因毒性杂质的定量分析方法研究

宁凡盛,王珊珊,李磊,林云良,王晓利,陈相峰*

山东省分析测试中心,山东 济南

收稿日期:2017年3月26日;录用日期:2017年4月13日;发布日期:2017年4月17日

摘 要

文章建立了气相色谱-串联四极级杆质谱法测定3-硝基苯磺酸甲酯、3-硝基苯磺酸乙酯的方法,采用多反应监测(MRM)模式,有效地降低基质干扰,在0.05~1 µg/mL的范围内,两种目标物的线性相关系数都在0.99以上,通过方法精密度及准确度实验,样品在两个加标浓度水平下准确度均在95.0%~110.0%之间、方法精密度在1.5%~3.0%之间,准确度及精密度良好,该方法能完全满足盐酸兰地洛尔杂质中的3-硝基苯磺酸甲酯、3-硝基苯磺酸乙酯的检测。

关键词 :气相色谱-串联四级杆质谱,多反应监测,精密度,准确度,适用性

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http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/

1. 引言

肾上腺素β1受体阻断药主要用于处理高血压冠心病以及心律失常等 [1] [2] [3] 。目前,上市的超短效β1受体阻断剂仅有2个,第一个超短β1受体阻断剂由American Critical Care研制开发的艾司洛尔(Esmolol),除了可以降低心率外,大剂量艾司洛尔还可降低血压,但是艾司洛尔活性较低 [4] [5] [6] 。第二种是2002年在美国上市盐酸兰地洛尔(Landiolol Hydrochloride)是由日本小野制药工业株式会社研制开发的新型超短效β1受体阻断药 [7] [8] [9] 。该药具有更高的心脏选择性,主要用于手术时心动过速、心房纤维性颤动、心房扑动的治疗 [10] [11] [12] [13] 。盐酸兰地洛尔基因毒性杂质是指在原料药或辅料的生产中,以及在制剂制备过程中使用的,但在工艺过程中未能完全去除的有机物 [14] [15] [16] 。建立科学的分析方法有助于保证药品生产环境的质量控制。目前关于盐酸兰地洛尔中的3-硝基苯磺酸甲酯和3-硝基苯磺酸乙酯杂质的分析方法未见报到。本文采用气相色谱-串联四级杆质谱法建立了盐酸兰地洛尔中的3-硝基苯磺酸甲酯和3-硝基苯磺酸乙酯杂质的分析方法。

2. 实验部分

检测条件及样品处理

本实验运用Agilent 7890A-7000B (GC-QQQ)气相色谱-串联四极级杆质谱仪;气相色谱条件:色谱柱为HP-5ms (30 m × 250 µm × 0.25 µm),柱温箱升温程序为:50℃以10℃/min升至220℃保持1 min,再以每分钟30℃升至280℃保持5 min。进样口温度300℃。采用脉冲不分流进样模式。载气使用高纯氦气,流速为1.0 mL/min。进样体积为1.0 μL。

质谱条件:采集模式用多反应监测(MRM)模式;离子源温度为230℃。各杂质组分质谱定量/定性离子见表1

配制储备溶液:稀释溶剂使用色谱级N,N-二甲基甲酰胺。

对照品溶液:精密称定3-硝基苯磺酸甲酯标样(辰欣药业股份有限公司提供,批号:20140914) 10.2 mg,置10 mL棕色容量瓶中,N,N-二甲基甲酰胺稀释定容,得1.02 mg/mL标准溶液;精密称定3-硝基苯磺酸

Table 1. Mass parameters of 3-sulfonic acid methyl ester and 3-sulfonic acid ethyl ester

表1. 3-硝基苯磺酸甲酯、3-硝基苯磺酸乙酯的质谱参数

乙酯标样(辰欣药业股份有限公司提供,批号:20140915) 10.1 mg,置10 mL棕色容量瓶中,N,N-二甲基甲酰胺稀释定容,得1.01 mg/mL标准溶液。各精密量取上述储备液标准溶液各1.0 mL置于10 mL容量瓶中,N,N-二甲基甲酰胺稀释至刻度,摇匀后得100 µg/mL混合标准储备溶液A。

供试品溶液:取盐酸兰地洛尔试样约300 mg,精密称定,置于10 mL棕色容量瓶中,N,N-二甲基甲酰胺稀释定容,摇匀后超声5分钟,作为供试品溶液待测。

3. 结果与讨论

3.1. 专属性实验

1) 空白溶剂:N,N-二甲基甲酰胺,待测。

2) 空白样品溶液:精密称定空白样品300.1 mg,置10 mL量瓶中,N,N-二甲基甲酰胺稀释定容,作为空白样品溶液,待测。

3) 3-硝基苯磺酸甲酯定位溶液:直接取浓度为1 mg/mL的3-硝基苯磺酸甲酯标准溶液1.0 mL于1.5 mL安捷伦进样瓶中,待测。

4) 3-硝基苯磺酸乙酯定位溶液:直接取浓度为1 mg/mL的3-硝基苯磺酸乙酯标准溶液1.0 mL于1.5 mL安捷伦进样瓶中,待测。

5) 空白样品加混标溶液:准确称取盐酸兰地洛尔样品300 mg,置于10 mL容量瓶中,准确加入浓度为100 µg/mL的标准溶液1.0 mL,稀释定容。摇匀后超声5分钟,作为空白样品加标溶液,待测。

分别精密量取上述溶液各1.0 µL注入气相色谱串联质谱联用仪,记录总离子流图,结果见表2

3.2. 线性范围、定量限及检出限

取3-硝基苯磺酸甲酯、3-硝基苯磺酸乙酯对照品溶液A适量,逐级稀释配置成浓度分别为1.0 µg/mL (对照品溶液B)、0.5 µg/mL (对照品溶液C)、0.2 µg/mL (对照品溶液D)、0.1 µg/mL (对照品溶液E)、0.05 µg/mL (对照品溶液F)的3-硝基苯磺酸甲酯、3-硝基苯磺酸乙酯混合标准曲线溶液。相同方法,分别配制三条线性混合标准曲线溶液。

精密量取上述溶液各1.0 µL注入气相色谱-串联四级杆质谱仪,记录峰面积。以目标物杂质浓度为横坐标,以相应目标物峰面积为纵坐标做回归曲线,三条线性平均值计算回归方程及相应的线性回归系数。线性关系良好,相关系数均大于0.99。分别精密量取浓度为1.0 mg/mL的对照品储备液,逐级稀释各对

Table 2. Result of specific test

表2. 专属性试验结果

照品储备液,逐级精密量取稀释后溶液1.0 µL,上机分析,当对照品浓度稀释至其信噪比(S/N)约在10~15左右时即为仪器定量限,其信噪比(S/N)约在3~5时左右即为仪器检出限。以称取0.3 g样品计定容至10 mL计方法检出限、定量限。结果见表3

3.3. 方法精密度及准确度试验

由于样品中未检出各杂质,取盐酸兰地洛尔样品300.0 mg,置10 mL量瓶中,精确加入对照品溶液A,稀释配制浓度为0.2 µg/ml试品溶液,平行测定6次,计算RSD%,结果见表4。方法精密度相对标准偏差在1.5%~3.0%之间,精密度良好。

空白样品溶液:精密称定盐酸兰地洛尔样品300.0 mg,置于10 mL量瓶中,加稀释溶剂至刻度,摇匀后超声5分钟,作为空白样品溶液。平行制备3份。

加样回收率试验溶液:精密称定盐酸兰地洛尔样品300.0 mg,分别置于10 mL量瓶中,分别加入混标对照品溶液A,稀释配制浓度为0.2 µg/mL及0.5 µg/mL的加样回收率试验溶液。每个浓度平行制备3份。

精密量取上述供试品溶液1.0 µL注入气相色谱-串联四级杆质谱仪,记录离子流图。结果见表5。可以看出样品在两个加标浓度水平下准确度均在95.0%~110.0%之间,准确度良好。

3.4. 溶液稳定性实验

1) 对照品溶液稳定性

制备浓度为200 ng/mL的对照品溶液,分别于室温放置0小时、2小时、4小时、8小时和12小时、24小时,精密量取1.0 μL注入气相色谱-串联四级杆质谱仪,记录各杂质的峰面积。结果见表6

2) 供试品溶液稳定性

由于样品溶液中无目标物检出,两种化合物存在不同程度的不稳定性,所以设定考察5个小时内3-硝基苯磺酸甲酯、3-硝基苯磺酸乙酯的稳定性。参照样品加标溶液的制备方法制备一份200 ng/mL的加标溶液,分别于室温放置0小时、1小时、2小时、3小时和4小时、5小时,精密量取1.0 μL注入气相色谱-串联四级杆质谱仪,记录各杂质的离子流图,结果见表6。由表可以看出,对照品溶液在室温放置下3-硝基苯磺酸甲酯8个小时内衰减不明显,24小时后衰减25.9%;3-硝基苯磺酸乙酯衰减较慢,24小时后衰减7.29%。两种化合物均存在不同程度的不稳定性,实验过程中应现用现配。

3.5. 实际样品测定

取待测盐酸兰地洛尔试样3批,按上述方法检测,每批样品平行测定3次,测定结果见表7。标准样品总离子流色谱图见图1所示。

4. 结论

采用气相色谱-串联四级杆质谱法多反应监测模式测定盐酸兰地洛尔杂质3-硝基苯磺酸甲酯、3-硝基

Table 3. Linear range, regression equation, limit of detection and limit of quantitation

表3. 线性范围、回归方程、检出限及定量限

Table 4. Precision of the method

表4. 方法精密度试验

Table 5. Accuracy of the method

表5. 方法准确度试验

Table 6. Stability of the solution

表6. 溶液稳定性试验

Table 7. Detection of real samples

表7. 实际样品检测

Figure 1. Chromatogram of 3-sulfonic acid methyl ester and 3-sulfonic acid ethyl ester

图1. 3-硝基苯磺酸甲酯、3-硝基苯磺酸乙酯的色谱图

苯磺酸乙酯,方法检出限分别为1 μg/mL、0.8 μg/mL,仪器限检出限分别为30 ng/mL、25 ng/mL在0.05~1 μg/mL的线性范围内,线性关系良好,该方法精密度在1.5%~3.0%之间,溶液稳定性良好,该方法可以用于盐酸兰地洛尔杂质3-硝基苯磺酸甲酯、3-硝基苯磺酸乙酯的检测。

基金项目

山东省自然科学基金(批准号:ZR2012BQ009)。

文章引用

宁凡盛,王珊珊,李 磊,林云良,王晓利,陈相峰. 盐酸兰地洛尔原料药中基因毒性杂质的定量分析方法研究
Validation of Analysis Method of 3-Sulfonic Acid Methyl Ester and 3-Sulfonic Acid Ethyl Ester in Landiolol Hydrochloride[J]. 分析化学进展, 2017, 07(02): 60-66. http://dx.doi.org/10.12677/AAC.2017.72008

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*通讯作者。

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