ABSTRACT

Tissue culture and rapid propagation research was done on wild bletilla. The results showed that: 1) MS + 2.5 mg∙L⁻¹6-BA + 0.2 mg∙L⁻¹ NAA has the best induced effect, whose induction rate can reach 98%; 2) MS + IAA 2.5 mg∙L⁻¹ + 2.5 mg∙L⁻¹6-BA +2.0 mg∙L⁻¹ NAA has the best effect of induced proliferation, whose proliferation rate can be up to 3.8 times after 40 d culture; 3) 1/2 MS + 0.01 mg∙L⁻¹ NAA + 0.01 mg∙L⁻¹ IAA is conducive to take root and plants grow strong. The best rotten leaves seedling substrate consists of 60% leaf mold + 30% perlite + 10% vermiculite. The seedling survival rate can be improved in temperature of 23˚C - 28˚C and air relative humidity of 80% - 90%.

Keywords:Wild Bletilla, Tissue Culture, Proliferation, Domestication

野生白芨种苗快繁与驯化试验研究

徐森富，陈海锋，陈依桃

台州科技职业学院，浙江 台州

收稿日期：2016年1月2日；录用日期：2016年1月18日；发布日期：2016年1月22日

摘 要

对野生白芨进行组培快繁研究，结果表明：1) MS + 2.5 mg∙L⁻¹6-BA + 0.2 mg∙L⁻¹ NAA诱导效果最好，诱导率可达98%；2) MS + 2.5 mg∙L⁻¹ IAA + 2.5 mg∙L⁻¹6-BA + 2.0 mg∙L⁻¹ NAA诱导增殖的效果最好，培养40 d后增殖率可达3.8倍；3) 1/2 MS + 0.01 mg∙L⁻¹ NAA +0.01 mg∙L⁻¹ IAA有利于生根，且植株长势健壮。炼苗基质以60%腐叶土 + 30%珍珠岩 + 10％蛭石为佳；炼苗温度23℃~28℃，空气相对湿度80%~90%有利于提高炼苗成活率。

关键词 :野生白芨，组织培养，增殖，驯化

1. 引言

白芨(Bletilla striata)是兰科白芨属的一种多年生草本植物。又名为白根、地螺丝、白鸡儿、白鸡娃等。株高30~60厘米。块茎肉质，白色，具2~3叉呈菱角状，有须根，常数个并生，总状花序顶生，常有花3~8朵；花淡紫红色，花瓣不整齐。蒴果圆柱形，上有6条纵棱，两端稍尖。种子细小，多数。花期4~5月，果期7~8月。地下有粗厚的根状茎，如鸡头状，富粘性，含白芨胶质，即白芨甘露聚糖，可供药用，有止血补肺、生肌止痛之效，也可供作糊料，花美丽，也可供观赏 [1] 。传统的栽培主要靠分株繁殖,但分株繁殖周期长，且繁殖率很低，不能满足大规模生产的需求。虽然也可采用种子繁殖，但种子非常细小且无胚乳，因此在自然条件下很难萌发和生长，实生苗的栽培较难成活 [2] [3] 。作为中药的白芨销售前景看好，但扩大基地需要大量种苗，野生种又面临数量少较难大规模推广，且容易积累病毒，造成品种退化，严重影响产量和品质 [4] - [6] 。利用组织培养技术可以在短时间内繁殖大量优质种苗，一定程度上可以满足生产上对白芨苗的需要，因此采用组培方法开展系列试验与研究。

2. 材料与方法

2.1. 材料来源

白芨材料全部来自浙江省温岭市华翰白芨专业合作社，品种为野生白花白芨(Bletilla striata (Thunb.) Reichb. f. var. alba Hort)。

2.2. 材料处理

1) 预处理用肥皂水和软毛刷将白芨果荚表面清洗干净，然后用自来水冲洗10 min，每个果荚修理好备用。

2) 乙醇消毒在超净工作台上将果荚移入无菌瓶，倒入75%的乙醇浸没材料，轻摇1 min后倒出乙醇，用无菌水冲洗1次。

3) HgCl₂消毒用0.1% HgCl₂浸没上述材料，轻摇6~8 min后倒出HgCl₂液。

4) 无菌水清洗注入无菌杯适量的无菌水，晃动数次将水倒掉，如此重复5次，无菌纸吸干材料水分备用。

2.3. 培养及配置

以MS为基本培养基(含蔗糖3%，琼脂0.7%，pH为5.7)，并附加NAA和6-BA及IAA不同浓度组合的激素，制好后分装入150 mL组培瓶灭菌冷却待用 [7] [8] 。

3. 结果与分析

3.1 进行外植体预处理

选品性表现良好的植株，做上标记，然后对其进行外围杀菌处理。

3.2. 进行果荚诱导试验

在晴天采取健康白芨果荚，进行清洗和消毒处理，将已消毒的果荚内的种子用镊子取出放入诱导培养基，进行芽诱导培育 [9] [10] 。

将诱导出的白芨幼苗接种到MS并附加NAA和6-BA不同浓度组合的培养基上进行培养。M1、M2、M3、M4分别为1.5 mg∙L⁻¹ 6-BA + 0.2 mg∙L⁻¹ NAA、2.0 mg∙L⁻¹ 6-BA + 0.2 mg∙L⁻¹ NAA、2.5 mg∙L⁻¹ 6-BA + 0.2 mg∙L⁻¹ NAA、3.0 mg∙L⁻¹ 6-BA + 0.2 mg∙L⁻¹ NAA。实验结果表明(见表1)，以MS + 2.5 mg∙L⁻¹ 6-BA + 0.2 mg∙L⁻¹ NAA诱导效果最好这一组合的培养基为最适，诱导率可达98%；接种5 d后，幼苗开始生长，25 d后长至2~2.5 cm。

3.3. 进行白芨幼苗增殖试验

将已诱导出来的幼苗从植株分离，将其接种至增殖培养基中，M5、M6、M7、M8、M9、M10、M11、M12分别为不同IAA、6-BA与NAA激素组合(见表2)。试验结果表明以MS + 2.5 mg∙L⁻¹ IAA + 2.5 mg∙L⁻¹ 6-BA + 2.0 mg∙L⁻¹ NAA这一组合的培养基为最适，芽生长健壮，增殖达到3.8倍 [11] 。

3.4. 进行白芨幼苗生根试验

将经过增殖出来的幼苗放入生根培养基，经过生根培育使其达到完整植株的成苗为止，要求苗壮根肥为标准。M13、M14、M15、M16分别为不同NAA与IAA激素组合(见表3)，试验结果表明以1/2 MS + 0.01 mg∙L⁻¹ NAA + 0.01 mg∙L⁻¹ IAA这一组培养基为最适，生根质量较好。

表1. 不同培养基对幼芽诱导影响

表2. 不同培养基对幼苗分化影响

表3. 不同培养基对幼苗生根影响

表4. 不同基质对驯化苗影响

3.5. 进行白芨成苗出苗移栽

将已生根的完整健康植株从组培瓶中移栽出来，在大棚内进行驯化，然后炼苗种植。在炼苗期间，应严格控制温湿度，防治病虫害。

当生根苗长出发达根系，株高达3~4 cm时，移入温室打开瓶口，保持3 d，洗净根系上的培养基，移入72穴育苗盘，基质配比为草炭土：珍珠岩：蛭石(1:1:1) (见表4)。将育苗盘置于小荫棚培养，2周后根系长满，撤去荫棚，移入10cruxl0em营养钵，成活率达96%。

4. 讨论与结论

初代培养中将培养茎段上长出的新芽切下用于继代培养后，若原茎段还没有枯干时，将其重新接入新的培养基中，20 d后可从切口处长出1~3个新芽，这样可在短期内迅速建立大量无性系 [12] 。

在 MS培养基的基础上对影响白芨生长因素进行了试验，结果表明在不同光照时长白芨原球茎生长影响较大，随着光照时间的延长，白芨原球茎生长量也随着增长，当光照时间不足时白芨原球茎出现白化现象，甚至死亡 [13] 。当光照时间达到12 h以上时，白芨原球茎的生长较为旺盛，因此在实际应用时可以采用12 h光照时长。另外还试验了PH值对白芨生长的影响，白芨生长最佳 PH为5.7~6.6 [14] 。

在白芨组织培养快繁过程中，细胞分裂素BA和生长素NAA均可促进原球茎的诱导和增殖，培养基中激素种类和浓度对白芨增殖有很大影响。6-BA和NAA同时影响白芨丛生芽的增殖，NAA对增殖的影响大于6-BA，是白芨丛生芽增殖的主导因子。对野生白芨进行组培快繁研究结果表明：MS + 2.5 mg∙L⁻¹ 6-BA + 0.2 mg∙L⁻¹ NAA诱导效果最好；MS + 2.5 mg∙L⁻¹ IAA + 2.5 mg∙L⁻¹ 6-BA + 2.0 mg∙L⁻¹ NAA诱导增殖的效果最好；1/2 MS + 0.01 mg∙L⁻¹ NAA + 0.01 mg∙L⁻¹ IAA生根效果最好。炼苗基质以60%腐叶土 + 30%珍珠岩 + 10%蛭石为佳；炼苗温度23℃~28℃，空气相对湿度80%~90%有利于提高炼苗成活率。

基金项目

2015年度浙江省大学生科技创新项目(2015R463001)。

文章引用

徐森富,陈海锋,陈依桃. 野生白芨种苗快繁与驯化试验研究
Experimental Research on Rapid Propagation and Domestication of Wild Bletilla Seedling[J]. 植物学研究, 2016, 05(01): 34-38. http://dx.doi.org/10.12677/BR.2016.51006

参考文献 (References)