目的:探讨健脾除湿汤对脾虚型慢性湿疹小鼠血清IL-4、IFN-γ的干预作用。方法:将48只雄性Wistar小鼠分成六组(空白对照组、模型对照组、低剂量灌胃组、中剂量灌胃组、高剂量灌胃组、氯雷他定组),以化学致炎剂2,4-二硝基氯苯(DNCB)建立小鼠脾虚型慢性湿疹模型,使用健脾除湿汤进行模型干预,采用灌胃的途径给药,观察小鼠血清中IL-4、IFN-γ水平的变化。结果:脾虚型慢性湿疹小鼠的血清IL-4升高,IFN-γ降低;健脾除湿汤能使脾虚型慢性湿疹小鼠的血清IL-4降低,IFN-γ升高,其效果优于氯雷他定组。结论:健脾除湿汤通过对血清IL-4、IFN-γ的调节治疗脾虚型慢性湿疹,高剂量组效果好。<br/>Objective: To investigate the intervention effect of Jianpi Dedampness decoction on serum IL-4, IFN-γ in mice with chronic eczema of spleen deficiency type. Methods: 48 male Wistar mice were divided into six groups (blank control group, model control group, low dose gastric perfusion group, middle dose gastric perfusion group, high dose gastric perfusion group and loratadine group). The chronic eczema model of spleen deficiency type was established with chemical in-flammatory agent 2,4-dinitrochlorobenzene (DNCB). The model intervention was carried out with Jianpi Dedampness decoction, and the changes of IL-4, IFN-γ level in serum of mice were observed by intragastric administration. Results: The results of chronic eczema of spleen deficiency type were found in mice with chronic eczema of spleen deficiency type. Serum IL-4 increased and IFN-γ decreased, and Jianpi Dedampness decoction could decrease serum IL-4 and increase IFN-γ in mice with chronic eczema of spleen deficiency type, which was better than that of loratadine group. Conclusion: Jianpi Dedampness decoction can treat chronic eczema of spleen deficiency type by regulating serum IL-4, IFN-γ.
由丽娜,周璇,宋国宏,顾仁艳,热依汗古丽·乌修尔*
新疆医科大学第五附属医院中医科,新疆 乌鲁木齐
收稿日期:2019年9月24日;录用日期:2019年10月23日;发布日期:2019年10月30日
目的:探讨健脾除湿汤对脾虚型慢性湿疹小鼠血清IL-4、IFN-γ的干预作用。方法:将48只雄性Wistar小鼠分成六组(空白对照组、模型对照组、低剂量灌胃组、中剂量灌胃组、高剂量灌胃组、氯雷他定组),以化学致炎剂2,4-二硝基氯苯(DNCB)建立小鼠脾虚型慢性湿疹模型,使用健脾除湿汤进行模型干预,采用灌胃的途径给药,观察小鼠血清中IL-4、IFN-γ水平的变化。结果:脾虚型慢性湿疹小鼠的血清IL-4升高,IFN-γ降低;健脾除湿汤能使脾虚型慢性湿疹小鼠的血清IL-4降低,IFN-γ升高,其效果优于氯雷他定组。结论:健脾除湿汤通过对血清IL-4、IFN-γ的调节治疗脾虚型慢性湿疹,高剂量组效果好。
关键词 :慢性湿疹,IL-4,IFN-γ
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慢性湿疹是一种由迟发型变态反应所导致的皮肤炎症反应,皮疹以局限性浸润肥厚为主,瘙痒剧烈,慢性病程,易复发,病因复杂且诱发因素很多。我国一般人群患病率约为7.5%,美国为10.7% [
本研究拟于在化学致炎剂建立脾虚型小鼠慢性湿疹模型上,使用赵炳南医师自拟的健脾除湿汤进行模型干预,观察小鼠血清中IL-4、IFN-γ的变化,以期为健脾除湿汤治疗脾虚型慢性湿疹的临床进一步推广使用奠定基础及理论依据支持,同时为慢性湿疹中成药研制、开发打基础。
参照《药理实验方法学》,选用健康、雄性Wistar小鼠48只,2月龄,由新疆医科大学实验动物中心提供,体重18~22 g。饲养条件:室温20~26℃,空气通畅,相对湿度40%~70%,12小时光照维持,昼夜循环,动物自由摄食饮水。将实验小鼠分笼饲养,每笼8只。
2,4-二硝基氟苯,购于成都艾德化工有限公司,生产批号:4579;丙酮(分析纯),购于北京化工厂,生产批号:2009C518,小鼠血清中IL-4、IFN-γ定量酶联检测试剂盒等试剂。
健脾除湿汤干预药物为赵炳南老师治疗慢性湿疹临床疗效好且已收录入《赵炳南医案集》中的方药,该组成为薏苡仁15 g,生扁豆15 g,山药15 g,芡实9 g,枳壳9 g,萆薢9 g,黄柏9 g,白术9 g,茯苓9 g,大豆黄卷9,上述药物均由新疆医科大学第五附属医院中药房提供,将上诉中药材以传统治法,按每天成人等效剂量1倍、2倍、4倍制备成低剂量组、中剂量组、高剂量组煎剂,即以体表面积折算,灌胃给药剂量分别为28.6 g/kg、57.2 g/kg、114.4 g/kg (调整生药含量分别为1.425 g/ml、2.85 g/ml、5.7 g/ml)。
氯雷他定溶液的制备:氯雷他定片(商品名:开瑞坦,国药准字H10970410,上海先灵葆雅制药有限公司),按成人4倍等效剂量,用蒸馏水溶解制成混浊液,给药剂量0.0052g/kg (药物含量0.26g/L)。
1) 慢性湿疹动物模型:致敏前1 d,用电推剪去除小鼠腹毛,选取约2 cm × 2 cm范围备用。第1天,用加样器量取7% DNCB溶液25 μl涂抹于模型对照组、中药灌胃组、西药组小鼠腹部剪毛区激发致敏,第2天强化1次。第5天给小鼠背部剪毛,选取约2 cm × 2 cm范围备用。第6天开始,在实验组小鼠背部剪毛区分别涂抹0.5% DNCB溶液20 μl,每隔3 d 1次,共4次。每次激发后观察局部反应。
2) 脾虚型慢性湿疹动物模型:即在上诉慢性湿疹动物模型的基础上,采用大黄脾虚证动物模型进一步造模:按照参考文献模型对照组、中药灌胃组、西药组动物于第三次激发之日开始灌服大黄冷浸液,14 g/kg (即14 mL/kg),1次/d,连续7天。
1) 设立一组同龄同种在相同条件下饲养的正常鼠为空白对照组。
2) 设立模型对照组,给予等体积生理盐水灌胃。并设立健脾除湿汤灌胃组,分别设立低、中、高剂量的药物干预组,药物的低、中、高剂量以人常用剂量的1倍、2倍、4倍确定。同时设立西药组,给予氯雷他定溶液,按成人4倍的等效剂量灌胃。于末次激发后48 h开始给药,连续给药14天,之后观察临床疗效。
各组除干预方法外,其它条件完全相同。
末次给药后,将实验小鼠全部处死,留取血清中IL-4、IFN-γ待检测。
采用SPSS15.0进行单因素统计分析,p < 0.05为差异有统计学意义。
由表1可见,模型对照组血清IL-4升高,经灌胃治疗后,均有所降低(p < 0.05);氯雷他定组血清IL-4升高,经高剂量灌胃治疗后,有所降低(p < 0.05);模型对照组血清IFN-γ降低,经中剂量和高剂量灌胃治疗后,有所降低(p < 0.05);氯雷他定组血清IFN-γ升高,经高剂量灌胃治疗后,有所降低(p < 0.05)。
组别 | 例数 | IL-4 (ng/L) | IFN-γ (ng/L) |
---|---|---|---|
低剂量灌胃组 | 8 | 28.2 ± 1.7* | 5.9 ± 1.1 |
中剂量灌胃组 | 6 | 26.7 ± 1.2* | 6.7 ± 0.5* |
高剂量灌胃组 | 7 | 25.0 ± 1.4*# | 7.4 ± 0.9*# |
氯雷他定组 | 7 | 27.9 ± 1.7 | 6.2 ± 0.9 |
模型对照组 | 7 | 33.5 ± 2.8 | 5.6 ± 0.9 |
空白对照组 | 8 | 20.7 ± 1.5* | 9.7 ± 1.2* |
表1. 小鼠血清IL-4、IFN-γ值
*:与模型组比较,差异有统计学意义(p < 0.05);#:与氯雷他定组比较,差异有统计学意义(p < 0.05)。
湿疹的发病机制较为复杂,免疫因素发挥了重要作用,细胞免疫、免疫调节功能可能受到一定程度的影响 [
近年来研究表明Th1/Th2的动态平衡失调与湿疹发病密切相关,而Th亚群功能失衡引起细胞因子分泌紊乱在其炎症发生发展、免疫应答调节、创面愈合等方面中起着重要作用 [
中医对湿疫的病因病机阐述颇多,各家言论不尽相同,但总体来看,大部分医家认为湿疹发病归咎于风、湿、热三邪,而心、脾、肺、肝等脏腑功能失调为基本病机。赵炳南 [
现代医学比较注重外在因素以及已有病变的治疗致敏源的检测、糖皮质激素治疗、抗生素的使用、抗组胺药的使用、镇静剂以及非特异性脱敏剂的使用等,临床治疗近期效果明显,患者皮损和瘙痒无法长期缓解,停药则皮损瘙痒复出,且毒副作用相对较大,给患者的生活工作学习带来了极大的不便和痛苦。中药治疗除局部治疗作用外,尚有全身整体调节之优越性,虽然中医中药治疗慢性湿疹取得了较好的疗效 [
通过本实验研究,我们发现健脾除湿汤通过对血清IL-4、IFN-γ的调节治疗脾虚型慢性湿疹,高剂量组效果好。
新疆医科大学创新基金(XYDCX201698)。
由丽娜,周 璇,宋国宏,顾仁艳,热依汗古丽·乌修尔. 健脾除湿汤对脾虚型慢性湿疹小鼠血清IL-4、IFN-γ的干预作用研究Effect of Jianpi Dedampness Decoction on Serum IL-4, IFN-γ in Mice with Chronic Eczema of Spleen Deficiency Type[J]. 中医学, 2019, 08(06): 372-376. https://doi.org/10.12677/TCM.2019.86060