Hans Journal of Biomedicine
Vol.06 No.01(2016), Article ID:16804,5 pages
10.12677/HJBM.2016.61001

The Expression of NF-КBP65 and BCL-2 Protein in Pleomorphic Adenoma

Changhui Chen1*, Weihua Xiao2

1Department of Stomatology, Beilun District People’s Hospital in Ningbo City, Ningbo Zhejiang

2Department of Oral and Maxillofacial Surgery, The Second Affiliated Hospital to Nanchang University, Nanchang Jiangxi

Received: Jan. 1st, 2016; accepted: Jan. 19th, 2016; published: Jan. 22nd, 2016

Copyright © 2016 by authors and Hans Publishers Inc.

This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY).

http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/

ABSTRACT

Objective: To detect the expression and discuss the expression meaning of NF-КBP65 and BCL-2 protein in pleomorphic adenoma. Methods: The expression of NF-КBP65 and BCL-2 protein in paraffin embedded specimens of pleomorphic adenoma and adjacent normal salivary gland tissue of 20 cases was detected using immunohistochemical S-P method. Results: The positive rates of NF-КBP65 expression in pleomorphic adenoma and adjacent normal salivary gland tissue were 55% and 10%, and the positive rates of BCL-2 expression were 35% and 10% respectively. The differences of NF-КBP65 and BCL-2 expression in pleomorphic adenoma and tumor adjacent normal salivary gland tissue were statistically significant (P < 0.05). Conclusion: NF-КBP65 and BCL-2 may play an important role in pleomorphic adenoma occurrence and development.

Keywords:Pleomorphic Adenoma, NF-КBP65, BCL-2, Immunohistochemical

NF-КBP65和BCL-2蛋白在多形性腺瘤中的表达

陈昌晖1*,肖维华2

1宁波市北仑区人民医院口腔科,浙江 宁波

2南昌大学第二附属医院口腔颌面外科,江西 南昌

收稿日期:2016年1月1日;录用日期:2016年1月19日;发布日期:2016年1月22日

摘 要

目的:检测NF-КBP65与BCL-2蛋白在多形性腺瘤及瘤旁正常涎腺组织中的表达情况,探讨NF-КBP65与BCL-2蛋白在多形性腺瘤的表达意义。方法:采用免疫组织化学S-P法检测20例涎腺多形性腺瘤组织石蜡标本中NF-КBP65与BCL-2蛋白表达水平,以瘤旁正常涎腺组织作为对照,进行组内及组间比较。结果:多形性腺瘤和瘤旁正常涎腺组织中NF-КBP65表达的阳性率分别为55%和10.0%,差异有统计学意义(P<0.05);BCL-2表达的阳性率分别为35%和10.0%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论: NF-КBP65 和BCL-2的协同作用可能对多形性腺瘤的发生、发展起重要作用。

关键词 :多形性腺瘤,NF-КBP65,BCL-2,免疫组化

1. 引言

NF-КB是最先在成熟的B细胞中被发现的一种核蛋白,它可通过对相应基因的转录调节,促进肿瘤的发生、肿瘤细胞的增殖、侵袭和转移[1] [2] 。而BCL-2是迄今研究的最深入和广泛的凋亡调控基因之一,但有关NF-КB与BCL-2在多形性腺瘤中表达的报道较少,且目前对BCL-2表达与该肿瘤的发生、发展及侵袭过程的关系及相关机制尚不完全清楚。有鉴于此,本研究采用免疫组化SP法检测NF-КBP65和BCL-2在多形性腺瘤、正常涎腺组织中的表达水平,分析NF-КBP65和BCL-2在多形性腺瘤中的表达情况及意义。

2. 材料与方法

2.1.材料

病例选自2006年1月~2010年12月南昌大学第二附属医院口腔颌面外科多形性腺瘤手术患者,共20例,其中男性13例,女性7例,平均年龄53.6 ± 9.8岁,所有患者均告知并同意其病理结果可以用于科学研究。以切除的多形性腺瘤组织为试验组,瘤旁正常涎腺组织为对照组。收集患者性别、年龄、肿瘤大小、部位等资料。所有患者术前未进行放化疗治疗。所有标本经病理检查确诊后经10%中性福尔马林液固定,常规石蜡包埋。

2.2. 主要试剂

小鼠抗人NF-КB P65单克隆抗体试剂盒和小鼠抗人BCL-2单克隆抗体试剂盒均购自北京中杉金桥生物技术有限公司。

2.3. 免疫组织化学染色(EliVisionTMplus二步法) [3]

标本制成4 μm石蜡切片,经二甲苯脱蜡,梯度酒精水化和PBS (PH = 7.4)冲洗后,切片放入高压锅中进行高温抗原修复,冷却后用PBS液冲洗,室温下孵育10分钟,加1滴一抗,置于4℃冰箱内过夜。第二天PBS冲洗结束后,加1滴聚合物增强剂,室温孵育20分钟。加1滴酶标抗兔聚合物,室温孵育30分钟。重复PBS冲洗步骤一次,加1滴新鲜配制的DAB显色液,显微镜下控制显色时间。水洗、苏木素复染、0.1%HCL分化和PBS返蓝。切片经酒精脱水干燥、二甲苯透明和树胶封片,最后在显微镜下观察组织。

2.4. 免疫组化阳性判断标准

NF-КBP65以胞浆或胞核出现棕黄色颗粒为阳性;BCL-2以胞浆或胞膜出现棕黄色颗粒为阳性。以阳性细胞所占比率 < 10%判定为阴性(−),10%~25%为弱阳性(+),26%~50%为中阳性(+ +),>51%为强阳性(+ + +)。弱阳性,中阳性,强阳性均记为阳性。

2.5. 统计学方法

采用SPSS 12.0统计软件包进行统计学分析,所有数据均以百分率表示(%),采用χ2检验。P < 0.05为差异具有统计学意义。

3. 结果

3.1. NF-КBP65在多形性腺瘤和瘤旁正常涎腺组织中的表达

NF-КBP65在多形性腺瘤和正常涎腺组织中的表达情况见图1表1。从该结果可以看出,NF-КBP65在多形性腺瘤中表达较为丰富,表达率为55%,而在癌旁正常涎腺组织表达率仅为10%,表达差异具有统计学意义(P < 0.05)。

3.2. BCL-2在多形性腺瘤和瘤旁正常涎腺组织中的表达

BCL-2在多形性腺瘤和瘤旁正常涎腺组织中的表达情况见图2表2。该结果表明,BCL-2在多形

Figure 1. The expression of NF-КBP65 in pleomorphic adenoma and adjacent normal salivary gland tissue. (A: Pleomorphic adenoma, B: Adjacent normal salivary gland tissue)

图1. NF-КBP65在多形性腺瘤和瘤旁正常涎腺组织中的表达× 400 (A:多形性腺瘤,B:瘤旁正常组织)

Figure 2. The expression of BCL-2 in pleomorphic adenoma and adjacent normal salivary gland tissue. (A: Pleomorphic adenoma, B: Adjacent normal salivary gland tissue)

图2. BCL-2在多形性腺瘤和瘤旁正常涎腺组织中的表达 × 400 (A:多形性腺瘤,B:瘤旁正常组织)

Table 1. The positive expression rate of NF-КBP65

表1. NF-КBP65的表达阳性率比较

注:组别间采用卡方检测,差异有统计学意义(P < 0.05)。

Table 2. The positive expression rate of BCL-2

表2. BCL-2的表达阳性率

注:组别间采用卡方检测,差异有统计学意义(P < 0.05)。

性腺瘤中的表达率为35%,明显高于其在瘤旁正常涎腺组织中的表达,两者差异具有统计学意义(P < 0.05)。

4. 讨论

大量的研究已表明,肿瘤的发生发展和细胞增殖与凋亡动态平衡受破坏有关[4] ,研究证实许多肿瘤中凋亡相关基因表达异常,主要是抑凋亡基因表达上调,促凋亡基因表达下调[5] [6] 。NF-КB是一种分布和作用均十分广泛的真核因子,NF-КB对多种凋亡抑制因子如c-IAP1、c-IAP2等有诱导性表达作用。NF-КB通过对凋亡蛋白和抗凋亡蛋白不平衡表达的调节作用,以及与肿瘤抑制蛋白(如p53)的直接作用实现抗凋亡功能[7] ;NF-КB所介导的对自我吞噬作用的抑制效应,是其发挥抗凋亡作用的新机制[8] 。越来越多的研究发现,NF-КB信号转导通路在癌变过程中起着重要作用[9] ,特别是RelA (p65)亚基可反式激活多种基因,调节细胞的生长、凋亡、血管生成和侵袭转移。p65蛋白在多种外界刺激下,脱离 IКB的阻滞而转位至细胞核,这是NF-КB信号转导通路活化的标志。

BCL-2是抑制细胞凋亡的基因,它并不改变细胞增殖,却可以抑制延缓细胞凋亡,延长细胞寿命,导致细胞数量增多[10] 。近年来文献显示在多种肿瘤组织内BCL-2都呈现过表达状态。有研究发现,原发性和复发性多形性腺瘤中BCL-2的表达相似,而恶性多形性腺瘤中BCL-2过表达。柴琳[11] 指出BCL-2的表达在口腔鳞癌的发生发展中起着重要的作用。提示BCL-2通过抑制细胞凋亡,从而导致肿瘤细胞的累积和恶性潜能的显现,推动肿瘤发展。本研究结果提示,BCL-2在多形性腺瘤有高表达,表明BCL-2的表达可以作为鉴别涎腺良性肿瘤和恶性肿瘤的参考依据。在恶性肿瘤中,BCL-2蛋白阳性表达越高的病人,恶性程度低,生存率高,预后好,表明BCL-2不仅在良恶性肿瘤的发生发展中起重要的作用,而且还可作为恶性肿瘤判断预后的指标。但这一推论目前仍存在着争议,尤金强等[12] 则认为BCL-2蛋白表达强度越强,临床预后可能越佳;Knowlton等[13] 的观点认为BCL-2不仅抑制了细胞凋亡,由此导致的细胞周期延长可能会延缓细胞增殖。BCL-2在癌组织中的表达意义还有待进一步研究。

已有研究证实BCL-2启动子上存在着NF-КB特异结合位点,被认为是NF-КB下游的一个重要靶基因NF-КBP65的过度激活,可大大增加BCL-2的表达[14] -[16] 。其调节其机制可能为:可使抗凋亡蛋白如BCL-x等凋亡抑制蛋白和TNF受体相关因子的转录增加;阻断Fas介导的凋亡通路,从而抑制癌细胞凋亡;NF-КBP65通过增加其下游基因,如细胞周期素、肝细胞生长因子表达,促进肿瘤细胞的生长;抑制NF-КBP65活性或阻止IКB降解的药物可增加癌细胞凋亡,抑制癌细胞生长。Dai LC等[17] 在人肝细胞癌的研究结论也支持本实验观点。

本研究结果表明NF-КBP65,BCL-2在多形性腺瘤中有较高表达,提示NF-КBP65,BCL-2的表达水平可作为涎腺肿瘤判断预后的可能筛选因子,并为鉴别涎腺良性肿瘤和恶性肿瘤提供一定的参考依据。此外,深入研究NF-КBP65,BCL-2信号转导通路在多形性腺瘤发生中的作用机制,可能会为多形性腺瘤的诊断和治疗提供新的思路。

基金项目

浙江省卫生厅一般项目(No.2012KYB188)。

文章引用

陈昌晖,肖维华. NF-КBP65和BCL-2蛋白在多形性腺瘤中的表达
The Expression of NF-КBP65 and BCL-2 Protein in Pleomorphic Adenoma[J]. 生物医学, 2016, 06(01): 1-5. http://dx.doi.org/10.12677/HJBM.2016.61001

参考文献 (References)

  1. 1. Hagemann, T., Wilson, J., Kulbe, H., et al. (2005) Macrophages Induce Invasiveness of Epitheial. Cancer Cell via NF-KB and JNK. The Journal of Immunology, 175, 1197-1205. http://dx.doi.org/10.4049/jimmunol.175.2.1197

  2. 2. Bernal, M.B. and Lovely, L. (2006) The Role of NF-KB and NF-KB-2 Mediated Rapopptosis in Lymphomas. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America, 103, 9220-9222.

  3. 3. 张亘, 黄燕红, 李静. 磷酸化P53与ERα在乳头状甲状腺癌中的相关性研究[J]. 中国医科大学学报, 2015, 44(1): 51-54.

  4. 4. Groeger, A.M., Esposito, V., De-Luca, A., et al. (2004) Prognostic Value of Immunohistochemical Expression of p53, bax, Bcl-2 and Bcl-xL in Resected Non-Small-Cell Lung Cancers. Histopathology, 44, 54-63. http://dx.doi.org/10.1111/j.1365-2559.2004.01750.x

  5. 5. Cory, S., Huanng, D.C. and Adams, J.M. (2003) The Bcl-2 Family: Roles in Cell Survivaland Oncogenesis. Oncogene, 22, 8590-8607. http://dx.doi.org/10.1038/sj.onc.1207102

  6. 6. Gobe, G., Rubin, M., Williams, G., et al. (2002) Apoptosis and Expression of Bcl-2, Bcl-xL, and Baxin Renal Cell Carcinomas. Cancer Investigation, 20, 324-332. http://dx.doi.org/10.1081/CNV-120001177

  7. 7. Katori, H., Nozawa, A. and Tsukuda, M. (2007) Increased Expression of Cyelooxygenase-2 and Ki-67 Are Associated with Malignant Transformation of Pleomorphic Adenoma. Auris Nasus Larynx, 34, 79-84. http://dx.doi.org/10.1016/j.anl.2006.09.006

  8. 8. Djavaheri-Mergny, M., Amelotti, M., Methieu, J., et al. (2006) NF-kappa B Activation Represses Tumor Necrosis Factors-Alpha-Induced Autophagy. The Journal of Biological Chemistry, 281, 30373-30382. http://dx.doi.org/10.1074/jbc.M602097200

  9. 9. 汤晓飞, 赵艳华, 张敏, 等. Nrf2和 NF-KB在口腔癌和癌前病变细胞中的表达及意义[J]. 北京口腔医学, 2009, 17(3): 135-137.

  10. 10. 魏温涛, 刘勤江. 上皮钙黏蛋白、P53和Bcl-2在涎腺腺样囊性癌组织中的表达及与肺转移、神经浸润的相关性[J]. 兰州大学学报(医学版), 2007, 33(3): 17-19.

  11. 11. 柴琳. BCL-2在口腔鳞癌中的表达及意义[J]. 皖南医学院报, 2002, 21(4): 249-251

  12. 12. Ghosh, S. and Karin, M. (2002) Missing Piece in the NF-kappaB Puzzle. Cell, 109, 81-96.

  13. 13. Chen, C.L., Edelstein, L.C., et al. (2002) The Rel/NF-kappaB Farllily Directly Activates Expression of the Apoptosis Inhibtou bcl-x. Molecular Biology of the Cell, 20, 2687-2695. http://dx.doi.org/10.1128/MCB.20.8.2687-2695.2000

  14. 14. 尤金强, 王平. p53、bcl-2和bax基因蛋白表达与眼眶泪腺腺样囊性癌的关系[J]. 中华医学杂志, 2008, 88(28): 1978-1982.

  15. 15. Knowlton, K., Mancini, M., Creason, S., et al. (1998) Bcl-2 Slows in Vitro Breast Cancer Growth Despite Its Antiapoptotic Effect. Journal of Surgical Research, 76, 22-26. http://dx.doi.org/10.1006/jsre.1998.5277

  16. 16. 刘奔, 王帅, 林涛, 等. Bcl-2过表达对多柔比星诱导的膀胱癌细胞凋亡和NF-КB活化影响的观察[J]. 中华肿瘤防治杂志, 2009, 16(11): 841-844.

  17. 17. Dai, L.C., Wang, X., Yao, X., et al. (2007) Antisense Oligonucleotides Targeting Midkine Inhibit Tumor Growth in an in Situ Human Hepato Cellular Carcinoma Model. Acta Pharmacologica Sinica, 28, 453-458.

期刊菜单