¹济宁医学院临床医学院，山东 济宁

²济宁医学院附属医院检验科，山东 济宁

收稿日期：2023年2月21日；录用日期：2023年3月16日；发布日期：2023年3月22日

摘要

目的：研究乙型肝炎病毒(HBV)感染与自身免疫发生的相关性。方法：选取100例HBV感染者作为实验组，检测乙肝五项定量指标和病毒DNA (HBV-DNA)；同时选取50例健康体检者作为对照组。两组均采用间接免疫荧光方法进行抗核抗体(ANA)检测。结果：实验组ANA阳性率49%，与对照组(24%)比较，差异有统计学意义(P < 0.05)。ANA滴度以1:40为主(59.2%)，1:80和1:160的占比分别为24.5%和10.2%；健康对照组亦以低滴度为主，1:40和1:80占比分别为41.7%和58.3%。荧光核型以核均质型、颗粒型和胞浆颗粒型为主，其阳性率分别为：43.7%，22.4%和16.3%。乙肝五项定量的结果中，1 + 2 + 3 + 4 + 5的ANA阳性率最高，为100%；其次是1 + 2 + 3 + 5，阳性率为67.0%；1 + 3 + 5、1 + 3 + 4 + 5、1 + 4 + 5的阳性率分别为61.9%、50.0%和41.1%。HBV-DNA ≥ 1.0 × 10²且<1.0 × 10⁵拷贝标本中ANA阳性23例(53.5%)，≥1.0 × 10⁵且<1.0 × 10⁷拷贝的9例(64.3%)，≥1.0 × 10⁷且<1.0 × 10⁹拷贝的8例(44.4%)；各组间比较统计学无明显差异(P > 0.05)。结论：乙型肝炎病毒感染可以导致自身免疫的发生，但不同的乙肝五项定量模式和血清HBV-DNA载量与自身免疫无明显相关性。

关键词

乙型肝炎病毒，乙型肝炎五项定量，病毒载量，抗核抗体，自身免疫

Relative Study between Hepatitis B Virus Infection and Autoimmunity

Yu Li¹, Shuheng Hu², Qian Han¹, Jiang Yu², Li Li², Aihua Shen², Yiming Cheng², Jianwei Zhou^2*

¹Clinical Medical College of Jining Medical University, Jining Shandong

²Clinical Laboratory of Affiliated Hospital of Jining Medical University, Jining Shandong

Received: Feb. 21^st, 2023; accepted: Mar. 16^th, 2023; published: Mar. 22^nd, 2023

ABSTRACT

Objective: To study the possible relativity between hepatitis B virus (HBV) infection and autoimmunity. Methods: 100 patients infected with HBV were selected as the experimental group, serum five quantitative indicators and HBV-DNA of hepatitis B virus were detected. Meanwhile, 50 healthy subjects were selected as control group. Anti-nuclear antibody (ANA) was detected with indirect immunofluorescence assay. Results: The positive rate of ANA in the experimental group was 49%, which was significantly higher than 24% of the control group (P < 0.05). ANA titer was mainly 1:40 (59.2%), and the proportions of 1:80 and 1:160 were 24.5% and 10.2%, respectively. The healthy control group were also dominated by low titers, the proportion of 1:40 was 41.7% and that of 1:80 was 58.3%. The ANA patterns were mainly nuclear homogenous, granular and cytoplasmic granular, and the corresponding positive rate was 43.7%, 22.4% and 16.3%. For the five quantitative results of hepatitis B virus, the positive rate of ANA of 1 + 2 + 3 + 4 + 5 was the highest, which was 100%. The positive rate of 1 + 2 + 3 + 5 was 67.0%. The positive rates of 1 + 3 + 5, 1 + 3 + 4 + 5 and 1 + 4 + 5 were 61.9%, 50.0% and 41.1%, respectively. There were different ANA positive ratios in different HBV-DNA load: 23 cases (53.5%) for ≥1.0 × 10² and <1.0 × 10⁵ copies, 9 cases (64.3%) for ≥1.0 × 10⁵ and <1.0 × 10⁷ copies, 8 cases (44.4%) for ≥1.0 × 10⁷ and <1.0 × 10⁹ copies. There was no significant difference among all groups (P > 0.05). Conclusion: Hepatitis B virus infection can lead to the occurrence of autoimmunity, but the relativity between autoimmunity between HBV five quantitative indices and serum HBV-DNA load is not found in this study.

Keywords:Hepatitis B Virus, Hepatitis B Five-Item Quantification, Virus Load, Anti-Nuclear Antibody, Autoimmunity

Copyright © 2023 by author(s) and Hans Publishers Inc.

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1. 引言

近年来，病原微生物感染与自身免疫或自身免疫病的发生存在相关已被研究证实，比如在类风湿性关节炎患者(Rheumatoid Arthritis, RA)的关节组织中发现了细菌细胞壁的组成成分胞壁酸，而系统性红斑狼疮(Systemic Lupus Erythe Matosus, SLE)患者的EB病毒早期抗原抗体水平比健康人显著增高 [1]。乙型肝炎病毒作为临床上常见的病原体，其与自身免疫的相关研究也引起人们的重视。目前认为，乙型肝炎的发生与发展涉及患者自身的免疫状态。在乙型肝炎患者中，肝细胞病变并非HBV直接破坏，而是通过诱导机体对HBV产生免疫应答，引起免疫损伤，因而造成肝细胞的炎症损伤 [2]。本文以HBV感染者为对象，拟研究乙型肝炎病毒不同感染模式和病毒载量与自身免疫的相关性。

2. 资料与方法

2.1. 一般资料

2021年4月~2022年6月在济宁医学院附属医院就诊的HBV患者研究对象，选取100例。同时，选取50例正常体检者为健康对照。所有患者均经过伦理委员会审核通过并签署知情同意书。

纳入标准：1) HBV感染者：经化学发光法定量检测HBsAg明显高于参考范围和/或乙型肝炎病毒DNA定量检测结果 > 1.0 × 10² copy；2) 健康对照：HBV相关感染性指标的检测均为阴性。

排除标准：1) 有临床可查的其他病原体感染指标阳性；2) 患有肿瘤或血液系统疾病；3) 有系统性自身免疫病及治疗病史；4) 患有心血管、脑血管、肾炎及除HBV和HCV所致的肝炎；5) 近6个月内使用过免疫增强或免疫抑制药物；6) 孕产妇；7) 不孕不育患者。

2.2. 方法

抗核抗体采用间接免疫荧光法，抗核抗体谱采用化学发光法，试剂由江苏浩欧博生物医药股份有限公司提供；乙型肝炎病毒定量检测采用化学发光法，试剂由希森美康医用电子有限公司提供；以ABI 7500核酸分析仪检测乙肝病毒DNA。所有检测均严格按照说明书操作。

2.3. 统计学处理

运用SPSS 22.0软件进行统计学分析，计数资料采用x²检验，组间比较采用t检验。以P < 0.05为差异有统计学意义。

3. 结果

3.1. HBV感染与ANA阳性率

实验组ANA检测结果检出49例阳性，阳性率49%；对照组有12例检出ANA阳性，阳性率24%。两组比较，有显著性差异(P < 0.05)。

在49例HBV感染病例中，滴度1:40的29例(59.2%)，1:80的12例(24.5%)，1:160的5例(10.2%)，1:320的3例(6.1%)。对照组中，1:40的有5例(41.7%)，1:80的有7例(58.3%)。见表1。

表1. 实验组和对照组ANA滴度分布[例(%)]

3.2. HBV感染与ANA核型

在49例HBV感染合并ANA阳性结果中，以核均质型为主，共17例(34.7%)；核颗粒型次之，共11例(22.4%)；其次是胞浆颗粒型，共8例(16.3%)。另外，着丝点型和胞浆纤维型也各检测出1例(2.0%)。混合核型包括胞浆颗粒型 + 核颗粒型6例(12.2%)，胞浆颗粒型 + 核均质型1例(2.0%)，胞浆颗粒型 + 核仁型1例(2.0%)，核颗粒型 + 核均质型2例(4.0%)，胞浆颗粒型 + 核颗粒型 + 核均质型1例(2.0%)。在12例呈ANA阳性的健康对照组中，检测出核颗粒型8例(66.7%)，核均质型3例(25.0%)，核仁型1例(8.3%) (表2)。

表2. 实验组和对照组的ANA核型分析[例(%)]

3.3. 乙肝五项定量不同阳性模式与ANA阳性率

在乙肝五项定量的结果模式中，1 + 2 + 3 + 4 + 5的ANA阳性率最高，为100%；其次是1 + 2 + 3 + 5，阳性率为67.0%；1 + 3 + 5、1 + 3 + 4 + 5、1 + 4 + 5的阳性率分别为61.9%、50.0%和41.1%；1例1 + 2 + 4 + 5的ANA结果为阴性。各乙肝五项定量模式间进行比较，ANA阳性率的差异均无统计学意义(P > 0.05)。具体见表3。

表3. 实验组和对照组的ANA检测结果

注：1、2、3、4、5分别代表乙型肝炎病毒五项指标的HBsAg、HBsAb、HbeAg、HbeAb、HbcAb。

3.4. HBV-DNA不同载量与ANA阳性率

100例HBV感染者中，有75例HBV-DNA高于10² copy。病毒载量 ≥ 1.0 × 10²且<1.0 × 10⁵ copy的有43例，其中23例ANA阳性，占53.5%；≥1.0 × 10⁵且<1.0 × 10⁷ copy有14例，其中9例ANA阳性，占64.3%；≥1.0 × 10⁷且<1.0 × 10⁹ copy有18例，其中8例ANA阳性，占44.4%。各组间统计学无明显差异(P > 0.05)。具体见表4。

表4. HBV病毒复制活跃的患者ANA阳性情况

4. 讨论

近年来，HBV感染与自身免疫的相关研究越来越受到学者们的重视。一些研究证实HBV感染可以引起包括自身免疫性肝病、类风湿等在内的自身免疫性疾病 [3] [4]。但在临床实践中，HBV感染有关自身免疫的实验室检测并未普及，仅停留在临床研究的层面，且相关数据不甚一致。本实验中HBV感染病例中ANA的阳性率49%，显著高于健康对照组。这说明HBV感染可以导致机体自身免疫的发生，或者进一步而言，此种差异提示自身免疫病的发生可能与HBV感染相关。这与邹莉 [5] [6] 的研究相一致。但后两者的报道中ANA的阳性率低于本研究结果，这可能与选定的结果判读系统和使用的试剂不同有关。从ANA滴度分析，本研究与邹莉 [5] 的报道一致，结果均显示HBV感染者往往以低滴度的ANA阳性为主，只是阳性率不同，后者高于本实验，这应该是研究对象的选择差异造成的。

如表2所示，HBV感染合并ANA阳性结果中，核均质型为主，其次是核颗粒型和胞浆颗粒型。这与陈东 [7] 的报道基本一致。在另一篇文献中，虽然显示以上三种核型为主，但核颗粒型的比例要高于核均质型 [8]，原因可能在于低滴度下结果判读的误差造成的，因此建议在ANA检测中由两人阅片，以相互验证，减少误差。在本实验中，还发现有两种和三种核型同时出现的混合核型，可能提示HBV感染引起的自身免疫是一个复杂的致病机理，可导致多种自身抗体的产生。

本研究结果显示，在乙肝五项定量的结果模式中，1 + 2 + 3 + 4 + 5的ANA阳性率最高，其次是1 + 2 + 3 + 5，再就是1 + 3 + 5、1 + 3 + 4 + 5、1 + 4 + 51，1例1 + 2 + 4 + 5结果模式中ANA结果为阴性。这六个乙肝五项定量模式下的ANA阳性率比较，彼此之间的差异并无统计学意义，提示乙型肝炎病毒的抗原和抗体的水平与自身免疫发生几率无相关性，但也可能与标本量有关，如果增大样本分析，不排除显著性差异的存在。有文献报道，乙肝标志物存在模式与病毒增殖量相关 [9]，据此我们又观察了不同HBV-DNA载量与ANA阳性率之间的关系，结果发现不同病毒载量之间，ANA阳性率并无显著差异。此发现与邹莉 [5] 的报道一致。在较早的研究中，有学者报道HBV-DNA定量对数值梯度的升高，ANA等自身抗体的阳性率均有不同程度的增加 [10]。这种不一致可能与研究对象的选择有关，在肝功能指标(如ALT)异常的情况下，HBV-DNA高载量可能存在较为明显的相关关系 [10] [11]。这也提示，我们下一步的研究将以病毒载量和肝功能的状态作为关注的内容。

基金项目

本文受中华医学会医学教育分会和中国高等教育学会医学教育专业委员会医学教育研究课题(编号：2020B-N13241)和济宁医学院附属医院“苗圃”科研计划项目资助(编号：MP-MS-2021-013)。

文章引用

李 羽,胡树恒,韩 倩,于 江,李 莉,申爱华,程一鸣,周建伟. 乙型肝炎病毒感染与自身免疫的相关性研究
Relative Study between Hepatitis B Virus Infection and Autoimmunity[J]. 临床医学进展, 2023, 13(03): 4221-4226. https://doi.org/10.12677/ACM.2023.133605

参考文献