ABSTRACT

By ultrasound treatment, magnolol and honokiol in extraction of health products, ultimately determine the helium as the mobile phase. The column was DB-5 (30 m × 0.25 mm × 0.25 μm); flow rate was 1.0 ml/min; programmed temperature was 70˚C for 2 min; the temperature went up to 230˚C for 20 min with the rate of heating at 5˚C/min. Split injection was applied for sampling, where the split ratio is 50:1. This method had good separation effect, good repeatability, high recovery rate, which was consistent with the requirements of qualitative and quantitative analysis. The highest extraction rate of magnolol and honokiol in health products was obtained when the ethanol ultrasonic time is 30 min.

Keywords:Magnolol, Honokiol, Health Products

气相色谱–质谱法测定保健品中
厚朴酚与和厚朴酚含量

袁  君，赵红峰

普研标准技术服务有限公司，上海

Email: yj323885@sohu.com, zhf@gratech.com.cn

收稿日期：2014年6月2日；修回日期：2014年7月1日；录用日期：2014年7月11日

摘  要

利用超声处理，提取保健品中厚朴酚与和厚朴酚，最终确定氦气为流动相，色谱柱为DB-5(30 m × 0.25 mm × 0.25 μm)，流速1.0 ml/min，程序升温条件为70℃保持2 min，以5℃/min的速率升温至230℃，保持20 min，进样方式为分流进样，分流比为50:1，分离效果良好，重复性好，回收率高，符合定性定量分析的要求。乙醇超声时间为30 min的条件下, 保健品中厚朴酚与和厚朴酚提取率较高。

关键词

厚朴酚，和厚朴酚，保健品

1. 引言

厚朴为木兰科植物厚朴(Magnolia officinalis Rehd)或凹叶厚朴(Magnolia officinalis Rehd. Wils)的干燥干皮、根皮及枝皮，主产于四川、湖北、浙江、贵州、湖南等地[1] 。厚朴有很好的抑菌、抗炎作用及潜在的抗溃疡作用厚朴中抗菌作用的物质主要有酚类挥发油、生物碱等其对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌芽孢杆菌、假丝酵母毛霉枯青霉有很好的抑制作用[2] 。

厚朴中酚类物质以厚朴酚与和厚朴酚为主其他物质，分子结构如图1所示，还有四氢厚朴酚、异厚朴酚、冰基厚朴酚、辣薄荷基厚朴酚、辣薄荷基和厚朴酚、厚朴三醇异厚朴酚等[2] 。用紫外分光光度法对厚朴酚及和厚朴酚的抗氧化性的初步研究表明，厚朴酚有抗氧化活性[3] 。厚朴酚可抑制皮肤光老化，在化妆品中使用可以达到保护皮肤的作用[4] 。对于厚朴酚及和厚朴酚的含量测定方法很多，有薄层色谱法、高效液相色谱法、气相色谱法等。但未见用气-质联用测定保健品中和厚朴酚与厚朴酚含量，本文不仅建立了保健品中厚朴酚及和厚朴酚的含量测定方法，而且确定了定性定量的相关参数，从而为保健品中厚朴酚及和厚朴酚含量测定提供参考依据，以满足研究及质控的需求。

2. 材料与方法

2.1. 试验材料

本研究中样品选自市售某品牌厚朴保健口服液。

2.2. 试剂及耗材

1) 无水乙醇：色谱纯。

图1. 和厚朴酚与厚朴酚分子结构图

2) 标准物质(见表1)

3) 厚朴酚标准溶液：准确称取10 mg厚朴酚标准品于10 mL容量瓶中，用乙醇定容至刻度线。配制成浓度为1000 μg/mL的标准储备液，于4℃避光保存。

4) 和厚朴酚标准溶液：准确称取10 mg和厚朴酚标准品于10 mL容量瓶中，用乙醇定容至刻度线。配制成浓度为1000 μg/mL的标准储备液，于4℃避光保存。

5) 氦气：纯度大于等于99.999%。

2.3. 试验仪器

DB-5色谱柱(30 m × 0.25 mm × 0.25 μm)，气相色谱–质谱(GC-MS)联用仪(美国安捷伦公司)，

KQ-500VDE超声波清洗器(昆山市超声仪器公司)。

2.4. 测定方法

用离心管称取样品1.0000 g，加入20 mL乙醇后超声提取30 min，取出用乙醇定容至100 mL，再用乙醇稀释10倍，再超声10 min，用0.22 μm滤膜过滤备用。

2.4.1. 测定条件

流速：1 mL/min；程序升温：70℃保持2 min，以5℃/min的速率升温至230℃，保持20 min；传输线温度：250℃；进样口温度：280℃；进样方式：分流进样，分流比：50:1；进样量：1 μL；电离方式：电子轰击电离(EI)；电离能量：70 V；离子源温度：230℃；四级杆温度：150℃；扫描模式：选择离子扫描m/z 266，237，197。

2.4.2. 定量定性方法

定量方法采用外标法，定性离子如图2所示。

2.4.3. 校准曲线的制备

混合标准溶液：取10 mL容量瓶3只，分别加入和厚朴酚及厚朴酚标准溶液各2、1、0.5、0.2、0.1 mL，然后分别加入无水乙醇至刻度，此配制成的混合标准溶液为10、20、50、100、200 μg/mL。依次取标准溶液1 μL注入气相色谱仪，记下各次色谱峰面积，并绘制峰面积——厚朴酚或和厚朴酚浓度曲线。

图2. 和厚朴酚与厚朴酚碎片离子结构图

2.4.4. 测定

根据峰面积——厚朴酚或和厚朴酚浓度曲线，求得样品溶液中厚朴酚或和厚朴酚含量。

3. 结果与分析

3.1. 精密度试验

同一试样取两个平行样测定以其算术均值作为测定结果，计算结果保留两位有效数字。在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差不得超过算术平均值的10%。厚朴酚浓度的RSD为0.60%(n = 6)，和厚朴酚浓度的RSD为0.40%(n = 6)，均符合定量分析要求(见表2)。

3.2. 标准曲线及线性关系

由表3、4可知，厚朴酚回归方程分别为y₁ = 2.75x₁² + 8.423x₁ − 6.092，r₁ = 0.9995；y₂ = 2.795x₂² + 8.464x₂ − 5.888，r₂ = 0.9998；y₃ = 2.729x₃² + 8.974x₃ − 6.761，r₃ = 0.9996，在线性范围内与峰面积均呈良好的线性关系；和厚朴酚回归方程为y₁ = 5.717x₁² + 2.334x₁ + 6.853，r₁ = 0.9999；y₂=7.598x₂² + 2.117x₂ + 1.001，r₂ = 0.9998；y₃ = 7.066x₃² + 2.201x₃ + 7.781，r₃ = 0.9999，在线性范围内与峰面积均呈良好的线性关系。厚朴酚与和厚朴酚校正曲线回读值均在80%~120%之间，均符合定量分析要求。

3.3. 检出限

根据仪器信噪比，厚朴酚和与厚朴酚的仪器检出限为1 μg/mL，在该浓度下仪器信噪比为10，定量限为10 μg/mL；由图3可知，在仪器检出限条件下，厚朴酚和与厚朴酚均有良好的分离度，均符合定性分析要求。

3.4. 回收率试验

由表5、表6可知，厚朴酚、和厚朴酚的平均回收率分别为98.52%、98.35%,其RSD分别为2.89%、1.96%。表明该方法回收率符合定量分析要求。

3.5. 稳定性测试

如表7所示，按(2.4)方法制备的样品溶液，分别在0, 2, 4, 6, 8, 10, 14, 16, 20, 24 h进样，厚朴酚峰响

图3. 和厚朴酚与厚朴酚总离子流图

图4. 厚朴酚与和厚朴酚提取离子图

应值的RSD为5.41%，和厚朴酚响应值的RSD为1.36%，结果表明该方法测试样品在24 h内稳定，符合定量分析要求。如图4所示。

4. 结论

本试验研究多种气相色谱条件，最终确定氦气为流动相，色谱柱为DB-5(30 m × 0.25 mm × 0.25 μm)，流速1.0 ml/min，程序升温条件为70℃保持2 min，以5℃/min的速率升温至230℃，保持20 min，进样方式为分流进样，分流比为50:1。分离效果良好，厚朴酚、和厚朴酚分别在32.83，35.21 min左右出峰，重复性好，回收率高，符合定性定量分析的要求。不仅建立了保健品中厚朴酚及和厚朴酚的含量测定方法，而且确定了定性定量的相关参数，从而为保健品中厚朴酚及和厚朴酚含量测定提供参考依据，以满足研究及质控的需求。

参考文献 (References)