ABSTRACT

A HPLC method was established to analyze Pyrazosulfuron-ethyl and Mefenacet simultaneously in WP formulation, using high performance liquid chromatography, with methanol and water as mobile phase, and ZORBAX SB-C18 5 µm column and ultraviolet detector at a wavelength of 250 nm. The linear correlation coefficients of 0.9995 and 0.9998 were obtained for Pyrazosulfuron-ethyl and Mefenacet, respectively. The standard deviations of 0.063% and 0.089% were obtained with the coefficient of variation of 1.4% and 0.13%. The average recoveries were 100.3%, 100.0%.

Keywords:Pyrazosulfuron-Ethyl, Mefenacet, HPLC, Analysis

75%吡嘧∙苯噻酰可湿性粉剂高效液相色谱分析

戴色琴¹，马克¹，倪登辉¹，孙青²

¹美丰农化有限公司，浙江 温州

²浙江永农化工有限公司，浙江 温州

收稿日期：2017年7月1日；录用日期：2017年7月17日；发布日期：2017年7月20日

摘 要

建立一种同时分析吡嘧磺隆和苯噻酰草安的高效液相色谱法。采用高效液相色谱法，以甲醇–水为流动相，使用ZORBAX SB-C₁₈、5 µm为填料的不锈钢色谱柱和紫外检测器，在250 nm波长下对吡嘧磺隆、苯噻酰草胺进行分离和定量分析，吡嘧磺隆和苯噻酰草胺的线性相关系数分别为0.9995和0.9998；标准偏差分别为0.063%和0.089%；变异系数分别为1.4%和0.13%；平均回收率分别为100.3%和100.0%。

关键词 :吡嘧磺隆，苯噻酰草胺，高效液相色谱，分析

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1. 前言

吡嘧磺隆是一种高效磺酰脲类选择性水田除草剂。有效成分可在水中迅速扩散，被杂草的根部吸收后传导到植株体内，阻碍氨基酸的合成。迅速地抑制杂草茎叶部的生长和根部的伸展，然后完全枯死，对水稻安全。其药效不受温度影响，药效持久，一次性施用，能控制水稻生长期的多种杂草危害。苯噻酰草胺是选择性内吸传导型酰苯胺类除草剂，是细胞生长和分裂抑制剂，对幼原母细胞的分裂有特别强的抑制作用。主要通过芽鞘和根吸收，经木质部和韧皮部传导至杂草的幼芽和嫩叶，阻止杂草生长点细胞分裂伸长，当禾本科杂草(稗草)接触此药后很快聚集在生长点处。将一定比例的吡嘧磺隆原药、苯噻酰草胺原药、适宜的助剂和填料加工成的可湿性粉剂杀草谱广，且对水稻生长安全 [1] [2] 。

目前吡嘧磺隆、苯噻酰草胺的单剂可湿性粉剂已有相关的国家标准和行业标准 [3] [4] ，未发现有关75%吡嘧·苯噻酰可湿性粉剂产品的分析方法的相关报道，本文采用高效液相色谱法进行分析，该方法简单、快速、准确。可以作为企业生产过程质量控制和质检机构质量检测的参考方法。

2. 实验部分

2.1. 仪器和设备

岛津LC-20A高效液相色谱仪，可变波长紫外–可见光检测器；LabSolutions数据处理系统(日本岛津公司)；AE 240电子天平；SK3200LH型超声波振荡器。

2.2. 试剂和溶液

甲醇：色谱纯；水：新蒸二次蒸馏水。吡嘧磺隆 ≥ 98.0% (上海农药研究所)提供、苯噻酰草胺标准品质量分数 ≥ 98.0% (上海农药研究所提供)，75%吡嘧·苯噻酰可湿性粉剂(美丰农化有限公司配制)。

2.3. 仪器操作条件

不锈钢色谱柱：250 mm × 4.6 mm (id)，ZORBAX SB-C₁₈、5 µm填充物；流动相：ψ(甲醇:水) = (80:20)；流速1.0 mL/min；柱温25℃；进样量5 µL；检测波长250 nm。保留时间：吡嘧磺隆约4 min，苯噻酰草胺约5 min (图1、图2)。

2.4. 操作步骤

2.4.1. 标样溶液的配制

称取约0.007 g的吡嘧磺隆标样(精确至0.00002 g)，0.1 g左右的苯噻酰草胺标样(精确至0.0002 g)，置于50 mL具塞容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，超声振荡脱气10 min，静置降至室温，用甲醇补

图1. 75%吡嘧·苯噻酰标样色谱图

图2. 75%吡嘧∙苯噻酰试样色谱图

加至刻度，摇匀；移取以上标样溶液10.00 mL于50 mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，备用。

2.4.2. 试样溶液的配制

称取约0.15的试样(精确至0.0002 g)，置于50 mL具塞容量瓶中，用甲醇溶解，超声振荡脱气10 min，静置降至室温，用甲醇补加至刻度，摇匀；移取该溶液10.00 mL于50 mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀。进样前用0.45 μm孔径滤膜过滤，备用。

2.4.3. 测定

按上述色谱条件，待仪器稳定后，进几针标样溶液，到相邻2针的相对响应值变化 < 1.0%后，按标样溶液、试样溶液、试样溶液、标样溶液顺序进样，标样溶液及试样溶液色谱图(图1、图2)。

2.4.4. 计算

将测得的两针试样溶液以及试样溶液前后两针标样溶液中吡嘧磺隆、苯噻酰草胺峰面积进行平均。试样中吡嘧磺隆、苯噻酰草胺的质量分数(%)，按(1)式计算：

(1)

式中：A₁——标样溶液中吡嘧磺隆(或苯噻酰草胺)峰面积的平均值；

A₂——试样溶液中吡嘧磺隆(或苯噻酰草胺)峰面积的平均值；

m₁——吡嘧磺隆(或苯噻酰草胺)标样的质量，单位为克(g)；

m₂——试样的质量，单位为克(g)；

——标样中吡嘧磺隆、苯噻酰草胺的质量分数，%。

3. 结果与讨论

3.1. 实验条件的选择

3.1.1. 流动相的选择

实验中分别用了甲醇 + 水在不同比例进行选择比较，经测定，发现流动相ψ(甲醇:水) = (80:20)，流速1.0 mL/min时，各组分均能得到很好的分离，且基线平稳，峰型对称(图1)。

3.1.2. 柱温的选择

实验中分别做了 25 ℃ 、 30 ℃ 、 40 ℃ 三个温度下的相关实验，发现吡嘧磺隆、苯噻酰草胺在不同柱温下都能得到很好的峰型，随着温度的变化保留时间变化不大，考虑到室内温度通常为25℃左右，所以本方法柱温为25℃。

3.1.3. 波长的选择

通过岛津SPD-M 20A 高效液相色谱仪的光谱数据采集功能，获得吡嘧磺隆的紫外波长扫描图(图3)，苯噻酰草胺的紫外波长扫描图(图4)。从图3中可以看到吡嘧磺隆的最大吸收波长在202 m、242 nm附近，从图4中可以看到苯噻酰草胺在200~250 nm都有较大吸收，但在200~220 nm时，流动相有较大吸收，最后确定本方法选择检测波长为250 nm。

3.2. 分析方法的线性相关性试验

称0.013 g吡嘧磺隆标准品(精确至0.0002 g)于50 mL容量瓶用甲醇定容，用移液管移取1.0、3.0、5.0、7.0、9.0分别置于50 mL容量瓶用甲醇定容；称0.2 g苯噻酰草胺标准品(精确至0.0002 g)分别置于50 mL容量瓶用甲醇定容，用移液管移取1.0、5.0、10.0、15.0、20.0分别置于50 mL容量瓶用甲醇定容；在上述色谱条件下进行测定，以浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标作标准曲线，求得吡嘧磺隆线性方程为，相关系数为r² = 0.9995，苯噻酰草胺线性方程为，相关系数为r² = 0.9998。

图3. 吡嘧磺隆的紫外波长扫描图

图4. 苯噻酰草胺的紫外波长扫描图

表1. 75%吡嘧∙苯噻酰可湿性粉剂精密度试验结果

表2. 75%吡嘧∙苯噻酰可湿性粉剂准确度试验结果

3.3. 方法的精密度、准确度

从同一产品准确称取6个75%吡嘧·苯噻酰可湿性粉剂试样，按上述分析条件测得吡嘧磺隆平均含量为4.5%，标准偏差为0.063，变异系数为1.4%，苯噻酰草胺平均含量为70.6%，标准偏差为0.089，变异系数为0.13% (表1)。

在已知含量的试样中分别加入一定质量的吡嘧磺隆、苯噻酰草胺标准品配成5个已知样，在相同的色谱条件下进行测定，吡嘧磺隆的平均回收率为100.3%，苯噻酰草胺的平均回收率为100.0 (表2)。

4. 结论

通过实验表明，利用高效液相色谱法对75%吡嘧·苯噻酰可湿性粉剂中吡嘧磺隆和苯噻酰草胺的含量进行分析，分离效果好，准确度和精密度高，方法具有无干扰，方便快速的特点。

文章引用

戴色琴,马 克,倪登辉,孙 青. 75%吡嘧•苯噻酰可湿性粉剂高效液相色谱分析
Analysis of Pyrazosulfuron-Ethyl+ Mefenacet 75% WP by HPLC[J]. 农业科学, 2017, 07(04): 295-300. http://dx.doi.org/10.12677/HJAS.2017.74039

参考文献 (References)