贵州中医药大学药学院，贵州 贵阳

收稿日期：2024年3月14日；录用日期：2024年4月16日；发布日期：2024年4月29日

摘要

为了解箭叶淫羊藿根、根茎、叶、叶茎、叶柄、花叶、花茎、花柄共8个部位的含量差异，本研究采用HPLC法和UV法，对含量结果进行差异分析。分析结果表明，叶、根茎、根、叶茎等部位含量较高，其中以叶的含量最高，根与根茎的朝藿定C含量总体高于地上部位。本研究证明了2020年版《中国药典》所规定淫羊藿药用部位为叶的合理性。同时分析结果发现，根茎有开发作为药用部位的潜力。

关键词

箭叶淫羊藿，不同部位，含量差异

Study on the Difference of Content in Different Parts of Epimedium sagittatum

Qin Luo, Shenghua Wei, Juan Ye, Xushuang Qian, Lixia Yang, Xiaoqin Teng, Fulin Yan^*

College of Pharmacy, Guizhou University of Traditional Chinese Medicine, Guiyang Guizhou

Received: Mar. 14^th, 2024; accepted: Apr. 16^th, 2024; published: Apr. 29^th, 2024

ABSTRACT

In order to understand the content difference of 8 parts of Epimedium sagittatum, including root, rhizome, leaf, leaf stem, petiole, flower leaf, flower stem and HPLC and UV spectrophotometry were used to analyze the difference of content. The results showed that the contents of Epimedin C in leaves, rhizomes, roots and leaf stems were higher, and the content of Epimedin C in leaves was the highest. The content of Epimedin C in roots and rhizomes was higher than that in aboveground parts. This study proved the rationality of the medicinal part of Epimedium as leaf in the 2020 edition of “Pharmacopoeia of the People’s Republic of China”. At the same time, the analysis results showed that rhizomes had the potential to be developed as medicinal parts.

Keywords:Epimedium sagittatum, Different Parts, Difference of Content

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1. 引言

箭叶淫羊藿Epimedium sagittatum (Sieb. et Zucc.) Maxim. (别称“三枝九叶草”)来源于小蘖科Berberidaceae淫羊藿属Epimedium [1] ，为亚热带与温带多年生草本植物。在2020年版的《中华人民共和国药典》中，箭叶淫羊藿是淫羊藿药材的主要来源之一，为我国入药典的5种淫羊藿属植物中分布最广的品种，其种植区域主要集中于贵州省黔东南苗族侗族自治州的从江县和黔西南布依族苗族自治州的册亨县等地，种植方式以大田遮阴种植和林下仿野生种植为主。淫羊藿味辛甘，性温，归肝肾经，具有补肾阳、强筋骨、祛风湿等功效，常用于肾阳虚衰、阳痿遗精、筋骨痿软、风湿痹痛等症状 [2] [3] [4] 。现代药理研究表明，其具有促进雄性功能、改善心血管系统和骨骼系统功能、免疫增强及抗肿瘤等作用 [5] [6] [7] 。以淫羊藿为原材料的药物有仙灵骨葆胶囊、阿可拉定、喘可治注射液等，淫羊藿的开发利用取得了良好的社会经济效益。

从2010年起，中国药典将淫羊藿药用部位由“干燥地上部分”变更为“干燥叶” [8] 。至目前最新发行的2020年版药典，淫羊藿药材来源一直沿用2010年的相关规定 [9] 。现有文献报道多针对某一种淫羊藿不同部位指纹图谱或主要黄酮类成分进行分析 [10] [11] [12] ，但精确到如根、根茎、叶茎、花茎、叶柄、花柄等尚无系统的研究。为验证淫羊藿药用部位划分的合理性，本节以大田遮阴为代表的ZC组和林下种植为代表的PF组，作为本节实验对象，采用高效液相色谱法和紫外分光光度法等，对叶、叶柄、叶茎、花叶、花柄、花茎、根茎、根共8个部位化学成分进行差异分析和评价。

2. 实验材料、试剂与仪器

2.1. 实验材料

实验材料来源于黔东南苗族侗族自治州从江县增冲村箭叶淫羊藿种植基地和平瑞村箭叶淫羊藿种植基地，该地属于亚热带温暖湿润季风气候，地处于都柳江地带，境内水资源充足，土壤微酸性。

7月为药材采收期，该时间段的箭叶淫羊藿已达到药材采收标准。因此测量对象为7月的箭叶淫羊藿植株。以大田遮阴的增冲箭叶淫羊藿种群(ZZ组)和林下种植的平瑞枫香树箭叶淫羊藿种群(PF组)为代表，各随机选取10株长势有差异的植株，采收后放置阴凉通风处作阴干处理，将阴干后药材分为根、根茎、叶、叶茎、叶柄、花叶、花茎、花柄共8个部位(图1)。分别进行粉碎并过筛(20目、60目)，自封袋保存备用。

2.2. 实验试剂

主要试剂有乙腈、乙醇、甲醇等，批号及厂家等详细信息见如下表1。

图1. 箭叶淫羊藿不同部位形态图(PF)

表1. 试剂信息

2.3. 实验仪器

实验主要仪器由贵州中医药大学中药材种植养殖加工研究所平台提供，仪器型号、厂家等详细信息见表2。

表2. 仪器信息

3. 方法与结果

3.1. 方法

3.1.1. 实验方法

1) 水分测定

方法参照2020版《中国药典》四部水分测定法中的烘干法(通则0832)。因样品较少，取样量改为1 g：取过20目筛供试品粉末1 g，精密称定，开启瓶盖在100˚C~105˚C干燥5 h，将瓶盖盖好，移置干燥器中，放冷30 min，精密称定，再在上述温度干燥1 h，放冷，称重，至连续两次称重的差异不超过5 mg为止。根据减失的重量，计算供试品中含水量(%)。

2) 总灰分测定

参照2020版《中国药典》四部总灰分测定法(通则2302)。因样品较少，取样量改为1 g：取过20目筛供试品粉末1 g，置炽灼至恒重的坩埚中，称定重量(准确至0.01 g)，缓缓炽热，注意避免燃烧，至完全炭化时，逐渐升高温度至500˚C~600˚C，使完全灰化并至恒重。根据残渣重量，计算供试品中总灰分的含量(%)。

3) 浸出物测定

参照2020版《中国药典》四部醇溶性浸出物测定法(通则2201)项下的冷浸法。因样品较少，取样量改为1 g：取过20目筛供试品粉末1 g，精密称定，置50 mL的锥形瓶中，精密加稀乙醇25 ml，密塞，冷浸，前6 h内时时振摇，再静置18 h，用干燥滤器迅速滤过，精密量取续滤液5 ml，置已干燥至恒重的蒸发皿中，在水浴上蒸干后，于105˚C干燥3 h，置干燥器中冷却30 min，迅速精密称定重量。除另有规定外，以干燥品计算供试品中醇溶性浸出物的含量(%)。

4) 总黄酮醇苷测定

色谱条件及系统适用性实验：色谱柱：Kromasil 100-5-C18色谱柱：(4.6 × 250 mm, 5 μm)；梯度洗脱见表3；流速：1 mL/min；柱温：30˚C；检测波长：270 nm；分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液10 μL进样，结果理论塔板数按淫羊藿苷峰计算不小于6000；分离度大于1.5。

供试品溶液的制备：取过60目筛供试品粉末0.2 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇20 mL，称定重量，超声处理(功率400 W，频率50 kHz) 1 h，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得，每份样品重复3次。

测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μL，注入液相色谱仪，测定。以淫羊藿苷对照品为参照，以其相应的峰为S峰，计算朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C峰的相对保留时间，其相对保留时间应在规定值的 ±5%范围之内(表4)。以淫羊藿苷对照品为对照，分别乘以校正因子，计算朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C和淫羊藿苷的含量，最后计算总黄酮醇苷的含量。不同部位高效液相色谱图见图2。

表3. 流动相梯度洗脱表

表4. 待测峰相对保留时间和校正因子

图2. 不同部位高效液相色谱图

5) 总黄酮测定

精密量取总黄酮醇苷项下(2.1.1.4)的供试品溶液0.5 mL，置50 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，作为供试品溶液。取供试品溶液，以相应试剂为空白，照紫外-可见分光光度法(通则0401)，在270 nm波长处测定吸光度。

取淫羊藿苷对照品加甲醇制成每1 mg·mL⁻¹的对照品溶液，分别取对照品溶液0 mL，0.05 mL，0.10 mL，0.15 mL，0.2 mL，0.25 mL，用甲醇定容至10 mL，以总黄酮吸光度为纵坐标(y)，以淫羊藿苷浓度为横坐标(x)，考察线性关系。回归方程和相关系数为y = 0.0366x − 0.0095，r² = 0.9996；结果表明总黄酮在该范围内线性关系良好。最后通过回归方程，计算供给品总黄酮含量。

6) 高效液相色谱仪方法学考察

① 线性关系考察

取淫羊藿苷对照品加甲醇制成每1 mg·mL⁻¹的对照品溶液，精密吸取该浓度下的淫羊藿苷对照品溶液0.001 mL、0.1 mL、0.5 mL、1.5 mL、2.5 mL、6.5 mL，加甲醇定容至10 mL，各进样10 μL测定，峰面积作为纵坐标，取样量为横坐标进行线性回归，所得回归方程是：y = 2E + 06x + 6579，r² = 0.9999，表明淫羊藿苷含量在上述范围内呈较好线性关系。以淫羊藿苷峰面积为对照，分别乘以校正因子，以峰面积为纵坐标(y)，对照品溶液进样量为横坐标(x)，考察朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C线性关系。回归方程及相关系数为：朝藿定A：y = 3E + 06x+ 8881.6，r² = 0.9999；朝藿定B：y = 3E + 06x + 8421.1，r² = 0.9999；朝藿定C：y = 3E + 06x + 8026.4，r² = 0.9999，结果表明朝藿定A、朝藿定B和朝藿定C分别在上述范围内线性关系良好。最后分别通过回归方程，计算供给品中朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿苷及总黄酮醇苷的含量。

② 专属性试验

精密吸取空⽩溶剂，供试品溶液，淫羊藿苷对照品溶液各10 μL，进样测定，⾊谱图显示对照品和供试品中朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C和淫羊藿苷的保留时间相同，且溶剂⼲扰⼩，表明该⽅法具有专属性，结果见图3。

图3. 空白对照、混合对照品和供试品高效液相色谱图(A：朝藿定A；B：朝藿定B；C：朝藿定C；苷：淫羊藿苷)

③ 精密度实验

取同一份对照品溶液反复进样6次，一次吸收10 μL，计算淫羊藿苷峰面积的RSD值为0.31%，表明该仪器精密度良好，结果见表5。

表5. 精密度实验结果

④ 重复性试验

重复取供试品药材粉末6份，每份约0.2 g，按照2.1.1.4项下的方法配制供试品溶液，每份进样10 μL测定淫羊藿苷含量，结果为12.5117 mg·g⁻¹，RSD为1.38%，表明该方法的重复性好，结果见表6。

表6. 重复性实验结果

⑤ 稳定性试验

重复取供试品药材粉末6份，每份约0.2 g，按照2.1.1.4项下的方法配制供试品溶液，分别于0 h，2 h，4 h，8 h，12 h，24 h进样测定，计算淫羊藿苷峰面积的RSD为0.76%，表明供试品溶液在24 h内稳定，结果见表7。

表7. 稳定性实验结果

⑥ 加样回收实验

回收率实验采用加样回收的方法。精密称定6份0.1 g供试品粉末，置具塞锥瓶中，向其中加入1 mg·mL⁻¹的淫羊藿苷对照品溶液各1.2512 mL，之后按照“供试品溶液制备”项下方法提取并测定，回收率计算结果为91.40%，RSD为2.97%，表明该方法准确度高，结果见表8。

表8. 回收率实验记录表

3.1.2. 数据分析

使用SPSS 22.0统计分析软件的单因素方差分析分别比较箭叶淫羊藿不同部位含量差异情况。再使用Excel绘制柱形图。

3.2. 结果

对ZC组和PF组箭叶淫羊藿的8个部位进行含量测定，结果见表9和图4。结合图表可知，水分、总灰分、浸出物、总黄酮、淫羊藿苷、朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C及总黄酮醇苷共9各指标在箭叶淫羊藿的不同部位含量差异较为明显。其中黄酮类化合物在叶片和花茎中含量最高，在花柄中最低。

水分含量最低的部位是叶茎、最高的是花茎，其中ZC花茎水分高达12.2645%。综合来看，ZC的水分含量比PF高；总灰分数据中，总灰分含量最低的部位仍是叶茎、最高的仍是花茎，同水分一样，ZC花茎总灰分高达8.6764%，已超出药典要求；浸出物数据中，无论是哪个部位，PF组浸出物含量均高于ZC组，其中含量最高的是PF组的花茎，高达25.3542%，其次是PF的叶，为24.8774%，最低的则是ZC组的叶茎，浸出物含量为6.9098%。

黄酮类化合物数据中，总黄酮、淫羊藿苷、总黄酮醇苷等含量，主要是在叶、根茎、根、叶茎等部位较高，其中以叶的含量最高，总黄酮、朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿苷、总黄酮醇苷含量最高是PF的叶，分别是17.2948%、0.1178%、0.0957%、2.8880%、1.7991%和4.9006%。在地下部位如根与根茎中，含量也较高，有的成分含量甚至高于地上部位，如朝藿定C，PF组的叶只有2.8880%，而根中有3.1971%，根茎中有3.0786%，总黄酮、总黄酮醇苷等含量，根及根茎的含量都高于花叶、柄、茎

表9. 箭叶淫羊藿不同部位含量比较

图4. 不同部位箭叶淫羊藿含量比较柱形图

等地上部位。在朝藿定B的数据中，PF组的叶含量竟远远高于其余的数据，有0.0957%，而最低的是PF组的叶柄，含量还达不到小数点后四位。整体来看，PF组的含量要高于ZC组，主要集中在叶、花茎、根及根茎部位，在叶柄、叶茎、花柄、花叶的含量少，但在叶柄、叶茎、花柄、花叶部位中，竟是ZC组高于PF组。

4. 讨论与结论

多年来，淫羊藿药材生产中一直视淫羊藿原植物的根、茎、叶柄等部位为杂质，造成了一定程度上的资源浪费，也增加了生产过程中能源及人力资源的消耗 [13] 。为了验证淫羊藿药用部位划分的合理性，本研究对箭叶淫羊藿不同部位中有效成分的含量进行了对比分析。由研究结果可以看出，箭叶淫羊藿含量主要集中于叶、花茎、根和根茎，而叶茎、叶柄等有效成分极少，在生产中应作为杂质除去，以增加药材品质，但叶茎、叶柄等生物量所占地上部位少，采收时可忽略继而采取地上部位当药用部位使用。箭叶淫羊藿根及根茎中有效成分如朝藿定C的含量最高甚至高于叶，郭宝林等 [14] 研究淫羊藿的不同部位黄酮类成分，结果表明，朝藿定C含量：根茎及根 > 叶 > 茎，与本研究结果相同，不仅如此，根及根茎中其他几种药典规定的指标性成分的含量之和也可以达到药典要求，表明箭叶淫羊藿地下部位也具有一定的药用开发价值。尽管药典收录的部位都不包含地下部分，但淫羊藿属植物为浅根性植物，药材采收时，为提高效率，通常连茎带叶扯起，扎成小把，这种方法极易将根茎连带拔起。且根据徐艳琴等 [15] 调查，湖北、四川和贵州等民间常以淫羊藿属植物的地下部分(含根茎和根)药用。可知有一定的合理性。但在中药栽培过程中，地下部位的根茎是淫羊藿属植物繁殖和自然更新的主要方式，从资源保护和可持续利用角度出发，也不建议地下部分入药。这体现了《中国药典》2010年版对药用部位修订的合理性。

本研究采用高效液相色谱法和紫外分光光度法，对箭叶淫羊藿不同部位的有效成分的差异进行分析，结果表明箭叶淫羊藿植株含量最高的部位叶、花茎，其次的根和根茎，而含量最低的是花柄。证明了2020年版《中国药典》所规定淫羊藿药用部位为叶的合理性。同时分析结果发现，根茎有开发作为药用部位的潜力。

基金项目

贵州省科技计划项目(黔科合支撑[2020]4Y112号)。

文章引用

罗 琴,魏升华,叶 娟,钱旭双,杨丽霞,滕小琴,严福林. 箭叶淫羊藿不同部位含量差异研究
Study on the Difference of Content in Different Parts of Epimedium sagittatum[J]. 中医学, 2024, 13(04): 829-838. https://doi.org/10.12677/tcm.2024.134130

参考文献