ABSTRACT

To study the fingerprints of Arctium lappa L. from different cultivation places. The HPLC conditions were employed by taking Shimadzu ODS (4.6 mm × 150 mm, 5 μm) and acetonitrile/water (gradient elution) as mobile phase, the rate of mobile phase was 1.0 mL·min⁻¹, the temperature of chromatographic column was 25˚C, detection wavelength was 280 nm. There were eleven peaks owned by all samples. This study established the HPLC fingerprints of Arctium lappa L., it can be used as the special identification for Arctium lappa L. The similar degrees were greater than 0.99. It was shown that the uniformity of the samples was nice.

Keywords:Arctium lappa L., HPLC, Fingerprint, Identification

不同产地牛蒡子的指纹图谱研究

宾婕¹，施建莲²，胡珊珊²，梁梦洁²，郭亚东²，林彦君²，吴双凤²，邓亮^2*

¹红河卫生职业学院，云南 红河

²昆明医科大学，药学院暨云南省天然药物药理重点实验室，云南 昆明

收稿日期：2017年11月7日；录用日期：2017年11月22日；发布日期：2017年11月29日

摘 要

应用HPLC对九个不同产地牛蒡子药材进行指纹图谱研究。使用岛津ODS柱(4.6 mm ´ 150 mm, 5 μm)，以乙腈–水为流动相，梯度洗脱，流动相流速：1.0 mL∙min⁻¹，柱温：25℃，检测波长：280 nm，得到11个共有峰，建立了牛蒡子药材的HPLC指纹图谱可用于牛蒡子药材的专属性鉴别，九个不同产地牛蒡子药材HPLC指纹图谱中，其相似度都大于0.99，说明不同产地的牛蒡子其质量的均一性很好。

关键词 :牛蒡子，指纹图谱，高效液相色谱，鉴别

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1. 引言

牛蒡(Arctium lappa L.)是菊科牛蒡属植物，它的根在东亚国家是一种传统的药用植物，也是一种蔬菜。牛蒡的种子叫牛蒡子，是一种传统中药材，性味苦，寒，辛，具有疏散风热，解毒消肿的作用，临床上多用于治疗风热咳嗽，咽喉肿痛，疮疡肿毒等症，在体外有抗氧化活性、清除自由基活性 [1] [2] [3] 。

目前从牛蒡子中分离得到的化合物主要有木脂素类、脂肪酸类，挥发油等 [4] [5] 。中药指纹图谱是指不同产地的某种中药所共有的特征性的某类化学成分的色谱的特征图谱，中药提取物的特征在于它是多种化学成分的混合体，中药的药效不是来自单一的活性成分，采用单一的活性成份或指标成份都难以准确地评判中药的质量优劣，而色谱指纹图谱技术是全面、整体地控制中药质量有效的方法 [6] ，本文应用RP-HPLC方法，对不同产地的牛蒡子进行指纹图谱研究，为其药材鉴别和质量控制提供实验依据。

2. 材料与方法

2.1. 样品

牛蒡子样品购自全国九个不同省份当地药材市场。

2.2. 仪器和试剂

仪器为Agilent Technologies 1260 Infinity (美国)，检测器为G412B DAD，数控超声波清洗器(型号KQ-700DB，昆山市超声仪器有限公司)，100目标准检验筛(浙江上虞市华丰五金仪器有限公司)，超纯水(倍捷科技MILLIPORE)，高速万能粉碎机(FW100，天津市泰斯特仪器有限公司)，电子秤：万分之一电子天平(BT224S)，滤膜：0.22 μm有机相针式滤器(上海市安谱实验科技股份有限公司)。乙腈和甲醇(色谱纯) (默克公司，德国)。

2.3. 供试品制备

样品100℃干燥后粉碎，过100目筛，每个样品各取300 mg，置250 mL锥形瓶中，分别精密加入50 mL甲醇，称重后超声处理(350 Hz) 40 min，放冷后用甲醇补足重量，0.22 μm微孔滤膜过滤。

2.4. 对照品溶液制备

精确称量5 mg的牛蒡苷元于10 mL的容量瓶中，用甲醇定容，得到浓度为0.5 mg/mL的对照品溶液。

3. 结果与分析

3.1. 色谱条件

色谱柱：岛津ODS柱(4.6 mm ´ 150 mm, 5 μm)，以乙腈–水为流动相，梯度洗脱(表1)，流动相流速：1.0 mL∙min⁻¹，柱温：25℃，检测波长：280 nm，进样量10 μL。

在上述色谱条件下进样分析，得到对照品和样品的色谱图如图1所示。

表1. 梯度洗脱程序

图1. 对照品(左)和样品(右)的色谱图

3.2. 精密度试验

取同一供试品溶液，连续进样5次，分别对共有峰的保留时间和峰面积比值进行考察。结果表明，各共有峰的相对保留时间的相对标准偏差(RSD) < 0.10%，相对峰面积的RSD < 0.60%。说明精密度良好(见图2)。

3.3. 重复性试验

取同一批样品5份，精密称定，按1.3项下方法制备供试品溶液，分别进样测定各共有峰相对保留时间的RSD < 0.10%，相对峰面积的RSD < 0.30%。说明重复性很好(见图3)。

3.4. 稳定性试验

取同一供试品溶液，室温放置，分别于0 h，2 h，4 h，6 h，8 h，10 h，12 h，24 h，36 h进样测定，

图2. 精密度试验色谱图

图3. 重复性试验色谱图

各共有峰相对保留时间的RSD < 0.10%，峰面积RSD < 3.00%。说明稳定性好(见图4)。

3.5. 样品测定

九个不同产地的样品在上述色谱条件下测定，结果见图5和表2~表4。

4. 讨论

使用梯度洗脱分析了九个不同产地牛蒡子药材HPLC指纹图谱，色谱条件的优化中参考文献 [7] 。使用了甲醇–水和乙腈–水二个系统，最后选择乙腈–水，通过梯度洗脱可以得到比较满意的结果，其指纹图谱

图4. 稳定性试验色谱图

图5. 不同产地牛蒡子的指纹叠加图谱

表2. 九个批次牛蒡子共有指纹峰的保留时间/分

表3. 九批次不同产地牛蒡子共有指纹峰的峰面积

表4. 相似度计算结果

的重复性，稳定性都令人满意，可以用于牛蒡子药材的专属性鉴别，九个不同产地的样品其相似度都大于0.99，说明来自不同产地的牛蒡子其质量的均一性很好，说明色谱指纹图谱用于鉴定同种药材的质量结果可靠。

基金项目

云南省教育厅科学研究基金项目资助(2017ZDX074)，云南省科技厅–昆明医科大学应用基础研究联合专项资金项目【2017FE468(-186)】。

文章引用

宾 婕,施建莲,胡珊珊,梁梦洁,郭亚东,林彦君,吴双凤,邓 亮. 不同产地牛蒡子的指纹图谱研究
Identification of Arctium lappa L. from Different Cultivation Places by HPLC Fingerprint[J]. 药物资讯, 2017, 06(05): 121-126. http://dx.doi.org/10.12677/PI.2017.65020

参考文献 (References)