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Advances in Clinical Medicine
Vol. 13  No. 05 ( 2023 ), Article ID: 65196 , 7 pages
10.12677/ACM.2023.1351039

TPD52L1在胃癌中的表达及其 临床意义

汤小杰1，曲海霞2*

1青岛大学医学部，山东 青岛

2康复大学青岛医院(青岛市市立医院)消化内科，山东 青岛

收稿日期：2023年4月9日；录用日期：2023年5月3日；发布日期：2023年5月12日

摘要

目的：探究肿瘤蛋白家族D52 (TPD52)的成员TPD52L1 (TPD53)蛋白在胃癌及胃癌细胞中的表达，并分析其表达与胃癌患者临床病理特征的相关性。方法：收集2020年01月至2022年06月期间青岛市市立医院普外科经手术完整切除的胃癌及癌旁(距肿瘤组织5 cm以上，病理证实无癌组织浸润)标本总共33例。采用免疫组织化学法检测TPD52L1在33例胃癌组织中的表达，分析TPD52L1表达水平与胃癌病例特征的相关性。通过RT-qPCR检测TPD52L1在胃癌细胞系及人胃粘膜上皮细胞系中的表达水平。结果：在胃癌组织中TPD52L1的蛋白表达水平明显高于癌旁组织。此外，在胃癌细胞中，TPD52L1的蛋白表达水平同样高于正常人胃粘膜上皮细胞。结论：TPD52L1在胃癌组织中的表达水平明显高于癌旁组织，其表达水平与胃癌患者的性别、淋巴结转移情况有关。此外，在胃癌细胞中，TPD52L1的表达同样高于正常人胃粘膜上皮细胞。

关键词

TPD52L1，胃癌，临床病例特征

Expression of TPD52L1 in Gastric Cancer and Its Clinical Significance

Xiaojie Tang1, Haixia Qu2*

1Medical Department, Qingdao University, Qingdao Shandong

2Department of Gastroenterology, Affiliated Hospital of University of Health and Rehabilitation Sciences (Qingdao Municipal Hospital), Qingdao Shandong

Received: Apr. 9th, 2023; accepted: May 3rd, 2023; published: May 12th, 2023

ABSTRACT

Objective: To investigate the expression of TPD52L1 (TPD53) protein, a member of the tumor protein family D52 (TPD52), in gastric cancer and gastric cancer cells, and to analyze the correlation between its expression and clinicopathological characteristics in patients with gastric cancer. Methods: From January 2020 to June 2022, a total of 33 specimens of gastric cancer and its adjacent tissues (more than 5 cm away from the tumor tissue, pathologically confirmed without invasion of cancer tissue) were collected from the General Surgery Department of Qingdao Municipal Hospital. Immunohistochemical method was used to detect the expression of TPD52L1 in 33 cases of gastric cancer, and the correlation between the expression level of TPD52L1 and the characteristics of gastric cancer cases was analyzed. The expression level of TPD52L1 in gastric cancer cell lines and human gastric mucosal epithelial cell lines was detected by RT-qPCR. Results: The protein expression level of TPD52L1 in gastric cancer tissue was significantly higher than that in adjacent tissues. In addition, the protein expression level of TPD52L1 in gastric cancer cells is also higher than that in normal human gastric mucosal epithelial cells. Conclusion: The expression level of TPD52L1 in gastric cancer tissue is significantly higher than that in adjacent tissues, and its expression level is related to the gender and lymph node metastasis of gastric cancer patients. In addition, the expression of TPD52L1 in gastric cancer cells is also higher than that in normal human gastric mucosal epithelial cells.

Keywords:TPD52L1, Gastric Cancer, Clinical Case Characteristics

Copyright © 2023 by author(s) and Hans Publishers Inc.

This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY 4.0).

http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/

1. 引言

根据国际癌症研究机构发布的GLOBOCAN2020中的报告 [1] [2] 提示，恶性肿瘤的发病率及死亡率依然处于持续增长的状态。而胃癌是消化系统最常见的恶性肿瘤之一，它的全球新发病例数占所有恶性肿瘤新发病例数的5.6%，达到108.9万，全球死亡例数约占所有恶性肿瘤死亡例数的7.7%，约76.9万。在我国，随着医疗水平的不断提高以及居民医疗健康意识的提升，我国早期胃癌的诊断率逐渐提升，但是不能忽视的是我国胃癌还是以中晚期胃癌为主，2020年我国新发胃癌病例数达47.8万，死亡病例数约37.3万，均居所有癌种第3位 [3] ，带来较大的医疗负担。胃癌的预后评估和潜在治疗靶点的探索对胃癌患者及临床研究意义重大。

TPD52L1是肿瘤蛋白家族D52 (tumor protein D52, TPD52)的成员。TPD52L1目前被认为是一种乳腺癌的治疗靶点 [4] ，并在卵巢癌 [5] 、鼻咽癌 [6] 、膀胱癌 [7] 等多种肿瘤中高表达。但其在胃癌中的表达水平及生理作用未见报道。本研究通过使用免疫组织化学法及半定量免疫反应评分(IRS评分)来量化TPD52L1在胃癌中的表达，评估其与临床病理特征之间的相关性，并在胃癌细胞系中验证其表达情况。

2. 材料与方法

2.1. 免疫组织化学染色

2.1.1. 组织标本收集

收集2020年1月至2022年06月期间青岛市市立医院普外科收治的胃癌患者临床资料。纳入标准：1) 术前均未行放疗、化疗或其他辅助治疗；2) 术后病理明确为胃癌患者；3) 临床病历资料完整。排除标准：1) 继发于其他部位的胃癌；2) 合并其他肿瘤；3) 术前已接受放化疗；4) 临床病历资料不全。其中男性21例，女性12例，年龄36~84岁，中位年龄为65岁，此外我们记录了该33例胃癌患者的年龄、性别、肿瘤大小、分化程度、TNM分期、有无淋巴结转移及浸润深度等临床病例资料。本研究已通过伦理委员会审批，所有患者均知情同意，标本按照道德规范和法律标准处理并匿名。调用其患者病理蜡块制作切片型免疫组织化学分析。

2.1.2. 主要实验试剂及仪器

胃癌患者组织切片由青岛市市立医院病理科统一制作。一抗使用艾博抗(上海)贸易有限公司的TPD52L1抗体，DAB工作液使用福州迈新生物技术开发有限公司的DAB显色试剂盒。显微镜及照相系统使用日本OLYMPUS公司生产的BX-50电光源多头显微镜及BX-50全自动显微照相系统。

2.1.3. 实验方法

胃癌及癌旁组织石蜡切片经脱蜡和水化后使用EDTA缓冲液进行抗原修复。加入适量的内源性过氧化物酶阻断剂，室温孵育10分钟。根据组织大小，滴加50 μL一抗，37℃孵育60分钟。滴加100 μL或适量的反应增强液，室温孵育20分钟滴加100 μL或适量的增强酶标羊抗小鼠/兔IgG聚合物，室温孵育20分钟。在小试管中先加入0.85 mL蒸馏水，再按试剂A、B、C顺序加入试剂各50 μL，混匀即成DAB显色液，配制好的溶液避光存放。加入适量新鲜配制的DAB显色液，室温孵育30秒，在显微镜下根据颜色的发展情况掌握染色时间。自来水冲洗，苏木素染色液孵育20秒；分化、冲洗返蓝。脱水、透明、封片。

2.1.4. 结果判定

由高年资病理科医师使用半定量免疫反应评分(IRS评分)对所有免疫组织化学染色结果进行评分，分别依照A染色强度：不着色：0分，淡黄色：1分，棕黄色：2分，棕褐色：3分；及B阳性细胞百分率：≤5%：0分，6%~25%：1分，26%~50%：2分，51%~75%：3分，≥76%：4分进行评分，并相乘得出IRS分值(0~12)。

2.2. 实时荧光定量PCR

2.2.1. 细胞培养

人胃癌细胞系HGC-27、SNU-1及人胃黏膜上皮细胞GES-1均购于BNCC；SGC-7901为青岛大学医学部所赠。GSE-1使用DMEM高糖培养基(5%胎牛血清)，在37℃、含5% CO2的培养箱中培养。SGC-7901、SNU-1使用RPMI-1640培养基(5%胎牛血清)，在37℃、含5% CO2的培养箱中培养。HGC-27使用RPMI-1640培养基(10%胎牛血清)，在37℃、含5% CO2的培养箱中培养。

2.2.2. 主要实验试剂及仪器

PCR仪使用上海宏石医疗科技有限公司生产的PCR检测仪。使用赛默飞生产的紫外线分光光度仪。实验试剂购自宝日医生物技术(北京)有限公司。

2.2.3. 实验方法

按照qRT-PCR试剂盒检测TPD52L1的表达。TPD52L1的特异性引物序列为上游TGAACCGTTGCAAGGAACAG，下游为TCATCAGGTTCATGCCGAGT。反应条件：预变性，95℃持续30秒；PCR反应，95℃ 5秒~60℃ 34秒，该反应持续40个循环。采用ΔCt法进行相对定量分析。

2.3. 统计学处理

采用SPSS20.0进行统计分析和GraphPad Prism 8进行作图。数据以均数 ± 标准差(±S)表示。两组间比较采用t检验，AGMAT表达水平与患者临床病理特征相关性采用χ2检验。以P < 0.05表示差异有统计学意义。

3. 结果

3.1. IRS评分

通过ROC曲线将IRS评分分为高表达组和低表达组。分析结果提示最佳分界点为2.5，曲线下面积为0.8200，P小于0.0001，95% CI：0.4662~0.7781，定义评分大于最佳分界点2.5的为高表达组，小于最佳分界点的为低表达组(图1)。

Figure 1. ROC diagram

图1. ROC曲线图

3.2. TPD52L1在胃癌中的表达

免疫组化结果提示93.94%的胃癌中TPD52L1表达阳性，其中IRS评分大于2.5为高表达组，小于2.5为低表达组(图2)。

3.3. TPD52L1表达水平与胃癌临床病理特征的关系

使用c2检验对各组资料进行分析，结果表明，TPD52L1的表达水平与胃癌患者的性别(P = 0.027)、淋巴结转移情况(P = 0.047)有相关性，而与患者的年龄(P = 0.198)、肿瘤大小(P = 1)、分化程度(P = 0.301)、TNM分期(P = 0.443)及浸润深度(P = 0.125)无明显相关性(表1)。

3.4. TPD52L1在胃癌细胞中的表达

通过RT-qPCR检测胃癌细胞系和胃粘膜上皮细胞系中TPD52L1 mRNA的表达水平，发现在胃癌细胞中TPD52L1 mRNA达水平均高于胃粘膜上皮细胞GES-1 (图3)。

A、B为高表达组的免疫组化染色情况(A为×200，B为×400)；C、D为低表达组的免疫组化染色情况(C为×200，D为×400)。

Figure 2. Expression of TPD52L1 in gastric cancer

图2. TPD52L1在胃癌中的表达

Table 1. Relationship between expression level of TPD52L1 and clinicopathological characteristics of gastric cancer [n(%)]

表1. 胃癌组织中TPD52L1表达水平与胃癌临床病理特征的关系[n(%)]

Figure 3. Relative expression of TPD52L1 in gastric cancer cell lines and gastric mucosal epithelial cell lines

图3. TPD52L1在胃癌细胞系及胃粘膜上皮细胞系中的相对表达

4. 讨论

胃癌是消化系统最常见的恶性肿瘤之一，胃癌的发病因素复杂，可能与多种基因的异常表达有关 [8] 。胃癌的患病率和病死率较高。目前发展中国家的胃癌新发病例数占全世界胃癌新发病例数的70%以上，其中东亚的胃癌新发病例数约占50%，这些新发病例主要集中在中国 [9] 。随着医疗水平的提高和患者健康意识的加强，胃癌根治性治疗、放化疗结合的综合治疗方式改善了早期胃癌患者的预后，但由于胃癌患者早期症状不明显，导致多数患者明确胃癌诊断时已经处于癌症晚期，他们的生存率较低，仅20%左右 [10] 。90%的癌症患者中，侵袭和转移是死亡的主要因素，胃癌的转移和复发严重威胁着患者的生命，与不良的预后关系密切 [11] 。因此评估胃癌的预后评估和潜在治疗靶点的探索对胃癌患者及临床研究意义重大。

肿瘤蛋白家族D52 (tumor protein D52, TPD52)，包括TPD52、TPD52L1、TPD52L2和TPD52L3 [12] ，其相关研究证明D52家族的成员之间可以发生相互作用 [13] ，并在囊泡运输、细胞增殖和细胞凋亡中发挥作用。TPD52L1最早在1996年被发现。它可与其他TPD52家族成员形成同源二聚体或异二聚体 [13] ，并参与细胞增殖和钙信号的传导。一项研究结果显示其在乳腺癌中高表达，并被认为是乳腺癌细胞中的细胞周期调节蛋白 [14] [15] 。本研究采用胃癌进行试验，通过免疫组织化学法检测TPD52L1在胃癌细胞中高表达，之后应用c2检验分析各组资料提示TPD52L1的表达水平与胃癌患者的性别、淋巴结转移情况有相关性。之后又分别筛选三种胃癌细胞系(HGC-27、SGC-7901、SNU-1)和一种人胃黏膜上皮细胞(GES-1)，通过RT-qPCR技术检验四种细胞系中的TPD52L1的表达水平，由PCR结果提示，TPD52L1在胃癌细胞系中的表达均高于胃粘膜上皮细胞系。

5. 总结

综上所述，本研究显示胃癌组织中TPD52L1的表达明显高于癌旁组织，其表达水平与胃癌患者的性别、淋巴结转移情况有关。此外，在胃癌细胞中，TPD52L1的表达同样高于正常人胃粘膜上皮细胞。但限于本实验的总样本量较小，其临床作用仍需进一步验证。

文章引用

汤小杰,曲海霞. TPD52L1在胃癌中的表达及其临床意义
Expression of TPD52L1 in Gastric Cancer and Its Clinical Significance[J]. 临床医学进展, 2023, 13(05): 7447-7453. https://doi.org/10.12677/ACM.2023.1351039

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    16. NOTES

    *通讯作者。

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