ABSTRACT

Objective: To investigate the effect of Quzhi sanwei fang on liver function and serum lipid in mice with nonalcoholic fatty liver disease (NAFLD). Method: C57 mice were randomly divided into normal control group (NC, n = 8), model control group (MD, n = 8) and Quzhi sanwei fang group (QZSWF, n = 21), the NC group was fed with a normal diet, while the others were fed with high fat diet for 14 weeks to duplicate the model of NAFLD. The QZSWF group was fed QZSWF at the dose of 16 g/Kg/d on the first day of modeling, the rest were given the same volume of saline, and all treatments were kept 14 weeks. The changes of body weight, liver index, liver HE stain, and serum concentrations of ALT, AST, TC, TG, HDL and LDL were observed at the end of the experiment. Results: (1) Compared with the NC group, the body weight of the MD group increased significantly (P < 0.01) while liver index decreased significantly (P < 0.01), compared with the MD group, QZSWF group significantly decreased (P < 0.05), but the liver index did not change significantly. (2) In the model group, diffuse microvesicular steatosis, a few macrovesicular steatosis and significant steatosis of hepatocytes were found in liver cells, while only a few microvesicular steatosis exist in the hepatocytes of QZSWF group. (3) Compared with the NC group, the serum concentrations of ALT and AST of MD group rats were significantly higher (P < 0.01 and P < 0.05), but the QZSWF group rats were significantly lower than MD group rats (P < 0.01, P < 0.01). (4) Compared with the NC group, the serum content of TC in MD group rats was significantly increased (P < 0.05), while QZSWF group decreased significantly compared with the MD group (P < 0.05). Conclusion: QZSWF effectively alleviates steatosis of NAFLD mouse hepatocytes prophylactically, also with significant effects on protecting hepatocytes, lowering transaminase and reducing blood fat.

Keywords:QZSWF, NAFLD, Liver Function, Serum Lipid

祛脂三味方对非酒精性脂肪肝小鼠肝功能 和血脂的影响

沈婷婷¹，乐凡²，郑册¹，谢兰丰¹，张琴^1*

¹上海交通大学医学院附属上海市同仁医院感染科，上海

²复旦大学附属中山医院肝肿瘤内科，上海

收稿日期：2017年7月7日；录用日期：2017年7月21日；发布日期：2017年7月28日

摘 要

目的：观察祛脂三味方对非酒精性脂肪肝小鼠肝功能和血脂的影响。方法：C57小鼠随机分为正常对照组8只、模型对照组8只和祛脂三味方组21只，正常对照组给予正常饲料，其余给予高脂饲料14周复制非酒精性脂肪肝模型；祛脂三味方组在造模第一天开始按照16 g/Kg灌胃祛脂三味方，每天一次，共计14周，其余给予同体积生理盐水。实验结束观察各组小鼠体重、肝脏指数、肝脏HE以及血清ALT，AST，TC，TG，HDL，LDL含量的变化。结果：(1) 与正常组相比，模型组体重显著升高(P < 0.01)而肝脏指数显著下降(P < 0.01)，与模型组相比较，祛脂三味方组体重显著下降(P < 0.05)，但肝脏指数变化不明显；(2) 模型组肝脏细胞内可见弥漫性小泡和散在的大泡，肝细胞脂肪变明显；与模型组相比较，祛脂三味方组未见大泡，肝细胞内仅少量小泡可见；(3) 与正常组相比，模型组大鼠ALT和AST显著升高(P < 0.01和P < 0.05)，与模型组相比较，祛脂三味方组ALT和AST则显著降低(P < 0.01, P < 0.01)；(4) 与正常组相比，模型组大鼠血清中TC含量明显升高(P < 0.05)，TG和HDL有一定程度升高，但无统计学差异；LDL稍微下降，但无统计学差异；相比模型组，祛脂三味方组大鼠血清TC含量显著下降(P < 0.05)，TG，HDL和LDL略有下降，但无统计学意义。结论：祛脂三味方预防性给药能减轻非酒精性脂肪肝小鼠肝细胞脂肪变，具有显著的保肝降酶和降血脂作用。

关键词 :祛脂三味方，非酒精性脂肪肝，肝功能，血脂

Copyright © 2017 by authors and Hans Publishers Inc.

This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY).

http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/

1. 引言

非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)是一种与胰岛素抵抗(insulin resistance, IR)和遗传易感密切相关的代谢应激性肝脏损伤，其病理学改变为肝实质细胞脂肪变性和脂肪贮积，但患者无过量饮酒史。疾病谱包括非酒精性单纯性脂肪肝(nonalcoholic simple fatty liver, NAFL)、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)及其相关肝硬化和肝细胞癌 [1] 。治疗NAFLD的首要目标为改善IR，防治代谢综合征及其相关终末期器官病变；次要目标为减少肝脏脂肪沉积并避免因二次打击”而导致NASH和肝功能失代偿 [1] 。祛脂三味方(QZSWF)是根据中医对非酒精性脂肪肝的认识，拟定的治疗非酒精性脂肪肝的方药，临床验证其对脂肪肝确有疗效，实验研究也显示出良好的抗脂肪肝作用，现将部分实验研究报道如下。

2. 实验动物

C57小鼠37只，SPF级，雄性，6~8周龄，购于上海必凯实验动物有限公司，饲养于中国科学院上海药物研究所安评中心动物房，温度20 ± 1℃，湿度40%~70%，自由饮食饮水。动物实验方案经实验动物伦理委员会审批，符合动物福利和伦理原则，IACUC号：2015-10-PGY-11。

3. 实验饲料及药物

3.1. 饲料

60%高脂饲料(内含0.2%胆固醇)及对照饲料购买于南通特洛菲饲料科技有限公司。

3.2. 药物

祛脂三味方颗粒剂，由上海方心制药公司提供(配方：颗粒剂制备：将生山楂30 g，决明子30 g，虎杖20 g。按处方去三味药材，加水煎煮两次，第一次加水10倍量，煎煮2小时，第二次加水8倍量，煎煮1小时。虑取两次煎液，合并，浓缩至相对密度1.10 (80℃)，放冷，边搅拌边加入乙醇至乙醇浓度为60%，静置12小时，取上清液，浓缩至密度为1.35左右，60℃低温真空干燥。浸膏粉碎成细粉，加适量糊精，制成颗粒。批号20160102)。

4. 动物处理

4.1. 分组和造模

小鼠适应性喂养1周，按体重区组随机分为对照组8只，模型组8只和祛脂三味方组21只，对照组饲喂对照饲料，其余喂养60%高脂饲料(内含0.2%胆固醇)诱导非酒精性脂肪肝模型，共计14周，所有小鼠均自由饮食饮水。

4.2. 给药

祛脂三味方组从造模第一天开始按10 mL/Kg灌胃祛脂三味方，每天一次，共计14周；对照组和模型组灌胃等体积蒸馏水。

4.3. 动物处理和标本收集

处理前动物禁食不禁水过夜，记录体重，最后一次给药1 h后异氟烷麻醉1 min，摘眼球取血，收集血清(室温静置20 min，5000 rmp/min在4℃离心10 min，收集上清−80℃保存)；取血后立即脱颈处死小鼠，解剖取肝脏称重，取大叶一半中性福尔马林固定，一半OCT包埋，中叶1.5 mL EP管装，液氮速冻后转入−80℃保存。

5. 指标检测

5.1. 体重，肝指数

记录处死前各组动物体重和处死后各组动物肝脏湿重，并计算肝脏指数(肝脏指数 = 肝脏湿重/体重 × 100%)。

5.2. HE染色实验

按照常规HE染色对中性福尔马林固定的肝脏标本做HE染色：脱水，包埋，4 μm切片，烘片(71℃ 烘烤2 h)，脱蜡水化(二甲苯Ⅰ5 min，二甲苯II 5 min，无水乙醇I 5 min，无水乙醇II 3 min，95%乙醇2 min，85%乙醇2 min，75%乙醇2 min，蒸馏水2 min)，苏木素染色15 min，蒸馏水洗5 min，1%盐酸酒精分化30 s，自来水返蓝10 min，伊红染色3 s，95%乙醇2 min，无水乙醇2 min，二甲苯2 min，中性树胶封片，光学显微镜下观察。

5.3. 血清ALT和AST

生化自动检测仪测定血清中ALT，AST。

5.4. 血脂

生化自动检测仪测定血清中TG，TC，HDL，LDL。

6. 统计方法

数据分析使用SPSS 21.0，符合正太分布，方差相齐的使用表示，One-Way ANOVA进行方差分析，两两比较使用LSD检验；数据不符合正态分布则用中位数和四分位差表示，使用非参数检验(Kruskal-Wallis检验)。

7. 结果

7.1. 祛脂三味方对NAFLD小鼠体重和肝脏指数的影响

与对照组相比，模型组体重显著升高(P < 0.01)而肝脏指数显著下降(P < 0.01)；与模型组相比较，祛脂三味方组体重显著下降(P < 0.05)但肝脏指数变化不明显，如表1和图1。

7.2. 祛脂三味方对NAFLD小鼠肝脏HE病理染色的影响

对照组肝细胞排列整齐，核大而圆，位于细胞中央；模型组肝脏细胞内可见弥漫性小泡和散在的大泡，肝细胞脂肪变明显；与模型组相比较，祛脂三味方组未见大泡，肝细胞内仅少量小泡可见，如图2。

7.3. 祛脂三味方对NAFLD小鼠血清ALT和AST的影响

与对照组相比，模型组大鼠ALT和AST显著升高(P < 0.01和P < 0.05)，与模型组相比较，祛脂三味方组ALT和AST则显著降低(P < 0.01, P < 0.01)，如表2和图3。

7.4. 祛脂三味方对NAFLD小鼠血脂的影响

与对照组相比，模型组大鼠血清中TC含量明显升高(P < 0.05)，TG和HDL有一定程度升高，但无

表1. 祛脂三味方对NAFLD小鼠体重和肝脏指数的影响()

注：与对照组相比较，△P < 0.05，△△P < 0.01；与模型组相比较，*P < 0.05，**P < 0.01。

统计学差异；LDL稍微下降，但无统计学差异；相比模型组，祛脂三味方组大鼠血清TC含量显著下降(P < 0.05)，TG，HDL和LDL略有下降，但无统计学意义(见表3，表4，图4)。

8. 讨论

非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)是一种与胰岛素抵抗(insulin resistance, IR)和遗传易感密切相关的代谢应激性肝脏损伤，患者无过量饮酒史。疾病谱包括非酒精性单纯性脂肪肝(nonalcoholic simple fatty liver, NAFL)、

表2. 祛脂三味方对NAFLD小鼠血清ALT和AST水平的影响()

注：与对照组相比较，△P < 0.05，△△P < 0.01；与模型组相比较，*P < 0.05，**P < 0.01。

图1. 祛脂三味方对NAFLD小鼠体重和肝脏指数的影响

图2. 祛脂三味方对NAFLD小鼠肝脏病理的影响

表3. 祛脂三味方对NAFLD小鼠血脂的影响()

注：与正常组相比较，△P < 0.05；与模型组相比较，*P < 0.05。

表4. 祛脂三味方对NAFLD小鼠血脂的影响

图3. 祛脂三味方对NAFLD小鼠血清ALT和AST水平的影响

图4. 祛脂三味方对NAFLD小鼠血脂的影响

非酒精性脂肪性肝炎(NASH)及其相关肝硬化和肝细胞癌 [1] 。NAFLD的危险因素包括：高脂肪高热量膳食结构、多坐少动的生活方式，IR、代谢综合征及其组分(肥胖、高血压、血脂紊乱和2型糖尿病)。中医认为非酒精性脂肪肝的病机是土壅木郁，病因为长期过食肥甘厚味，化为湿热蕴结中焦，伤及脾胃致脾胃运化功能失常，水谷精微不能转输，化为湿浊，膏脂堆积，阻滞气机，气机升降失调，影响肝之疏泄功能，成土壅木郁之证 [2] 。

祛脂三味方由生山楂、决明子、虎杖三味药组成，山楂酸，甘，微温，归脾、胃、肝经，有消食化积，行气散瘀之力；决明子甘，苦，微寒，归肝、大肠经，擅清肝明目，润肠通便；虎杖苦，寒，归肝、胆、肺经，专清热利湿、活血化瘀。三药合用以消食导滞，清利湿热，活血化瘀，通导肠腑，共奏“消土壅”而“解木郁”之效。现代研究表明山楂中的总黄酮 [3] 、决明子总蒽醌 [4] 、以及虎杖中的虎杖苷和大黄素 [5] [6] 均对脂肪肝有干预作用，本次实验中观察到高脂饲料喂养的模型小鼠体重明显升高，肝细胞内可见弥漫性脂肪泡和散在的脂肪大泡，血清ALT，AST，TC升高，祛脂三味方采用预防性给药能明显干预上述指标的异常发展，尤其在改善肝细胞内脂肪储积方面效果显著。祛脂三味方有明显的抗脂肪肝、保肝降酶和降血脂作用。

前期实验观察到祛脂三味方有降低脂肪肝大鼠血清LDL的作用 [7] ，遗憾的是在本实验中并未观察到，其原因大概如下：(1) 实验用饲料质量参差不齐，在模型动物中表现不一；(2) 实验周期偏短，未能充分暴露所有病理性改变；(3) 血清样本不足，部分数据未体现出统计意义。

祛脂三味方预防性给药在干预脂肪肝方面有显著作用，无肝毒性却有保肝降酶降血脂作用，校优价廉，无疑是广大脂肪肝患者的福音。但目前对祛脂三味方干预脂肪肝的物质基础和作用机制还知之甚少，开展更多的关于祛脂三味方干预脂肪肝的物质基础和作用机制的研究迫在眉睫，对复方的普及推广和进一步成药开发也亟待进行。

基金项目

基于“土壅木郁”证候病机的祛脂三味方防治非酒精性脂肪性肝病的研究，上海市中医药发展办公室三年行动计划中医药传承和创新发展类-中医药创新内涵建设 ZY3-CCCX-3-3036。

文章引用

沈婷婷,乐 凡,郑 册,谢兰丰,张 琴. 祛脂三味方对非酒精性脂肪肝小鼠肝功能和血脂的影响
Effects of Quzhi Sanwei Fang on Liver Function and Serum Lipid in Mice with Nonalcoholic Fatty Liver Disease[J]. 中医学, 2017, 06(03): 175-182. http://dx.doi.org/10.12677/TCM.2017.63028

参考文献 (References)