ABSTRACT

Objective: To analyze and compare methylation status of PCDH10 gene in gastric cancer and nomal tissues. Methods: Methylation-Specific PCR (MSP) and RT-PCR (real-time RT-PCR) were applied to detect DNA methylation features of the PCDH10 gene in 100 smples. Results: The PCDH10 gene methylation in the gastric cancer tissues was significantly higher than that in normal tissues. Conclusion: PCDH10 DNA methylation is correlated with gastric cancer.

Keywords:PCDH10, MSP, RT-PCR, Gastric Cancer

PCDH10基因DNA甲基化在胃癌中的研究

鞠亚菲¹，姜相君^2*

¹山东省济宁市兖州区中医医院脾胃病科，山东 济宁

²青岛市市立医院消化内科，山东 青岛

收稿日期：2016年2月25日；录用日期：2016年3月13日；发布日期：2016年3月17日

摘 要

目的：探讨PCDH10(原钙粘蛋白10)基因DNA发生甲基化后，其表达与胃癌发生的关系。方法：采用甲基化特异性PCR (methy-lation specific PCR)法和实时荧光定量逆转录–多聚合酶链反应(real-time RT-PCR)方法检测100例胃癌组织及正常组织中PCDH10基因启动子区的甲基化情况。结果：胃癌组织中PCDH10基因的甲基化阳性率较正常组织明显升高，差异具有统计学意义。结论：PCDH10的基因DNA甲基化可能与胃癌发生有关。

关键词 :原钙粘蛋白10，甲基化特异性聚合酶链反应，实时荧光定量逆转录–多聚合酶链反应，胃癌

1. 引言

胃癌是常见的消化道恶性肿瘤，发病机制复杂，其发生发展与特定基因DNA甲基化状态改变密切相关。DNA甲基化是化是目前表观遗传学中的研究热点，特定基因DNA的甲基化与胃癌的发生发展，诊断治疗及预后密切相关。近年来，越来越多的研究结果显示原钙粘蛋白10 (PCDH10)的表达缺失与胃癌，结直肠癌及肝癌密切相关。本文拟通过对比胃癌组织与正常组织中PCDH10启动子区的甲基化情况，初步探讨PCDH10的表达缺失与胃癌的发病关系。

2. 资料与方法

2.1. 对象及分组

收集青岛大学医学院附属青岛市市立医院普外科2014年1月~2015年1月手术切除的胃癌肿瘤标本100例，标本均经病理科复核并确诊为原发性胃癌，其中男50例，女50例，平均年龄53.76岁 ± 11.89岁。

2.2. 标本搜集及储存

胃癌组织取自癌灶中央非坏死区域，正常组织取自与之配对的距离癌组织5 cm以上区域，取后立即置于RNA保存液中，−80℃冰箱保存，用于提取DNA和RNA，入选患者术中均行淋巴结清扫，术前未行放化疗，拥有完整的临床资料。

2.3. 检测指标及方法

组织DNA提取严格按照离心柱试剂盒(北京天根)操作说明书进行，保证提取的DNA无蛋白质及RNA污染。对DNA修饰后进行甲基化特异性PCR (methy-lation specific PCR)，提取RNA采用日本TakaRa公司的RNA提取试剂盒，提取后的RNA逆转录为cDNA保存于−20℃冰箱中，以进行RT-PCR反应。反应引物为PCDH10-F (bp120－GGCAAGTAACGGTGGAGATG.PCDH10-R(bp228C)-TCTCCGGATGGA TGTTCTTC (Invitrogen英潍捷基上海贸易有限公司)。

2.4. 统计学处理

应用SPSS17.0软件包进行统计学处理，计数资料比较采用χ2检验，P为双侧性检验，P < 0.05认为差异有统计学意义。

3. 结果

胃癌组织与正常组织中PCDH10启动子区的甲基化情况：胃癌组织中启动子区甲基化率为46.00% (46/100)，明显高于正常组织12% (12/100)，差异有统计学意义(χ2 = 21.04, P < 0.05)。PCDH10扩增曲线熔解曲线见图1，熔解曲线见图2。在胃癌组织中，PCDH10基因启动子区域的DNA甲基化导致了其基因表达缺失，PCDH10基因的甲基化状态与胃癌的发生有密切关系。

图1. PCDH10扩增曲线

图2. PCDH10熔解曲线

4. 讨论

DNＡ甲基化是对DNA的一种化学修饰，主要发生于胞嘧啶 [1] [2] ，通过甲基转移酶(DNA methyltransferance, DNMT)来实现 [3] [4] 。首先，DNMT与DNA结合，将目标核苷酸反转暴露于DNA双螺旋外，之后半胱氨酸的亲和基团与胞嘧啶第六位碳C6共价结合，从S-腺苷甲硫氨酸SAM处转甲基至胞嘧啶C5 [5] 上，从而形成甲基化状态。目前已有许多研究报道这两种之间的关系。Lou J [6] 和Fang JY [7] 等发现在胃癌组织中c-myc和c-Ha-ras基因甲基化水平降低，c-Ha-ras基因低甲基化是胃腺细胞早期癌变的一个重要遗传学事件。以往研究也证实了参与调节细胞周期的p14，p15，p16，CHF，RIZI基因，介导细胞信号转导的APC，PTEN，RASSF1，RUNX3，PDK1基因；参与DNA修复的hMLH1，MGMT，pS2基因及抑制肿瘤扩散生长和转移的E-cadherin，TIMP-3基因存在高甲基化。

PCDH10 (原钙粘蛋白10)是钙粘蛋白超家族成员，其4q28.3染色体区域在肝癌，结直肠癌，前列腺癌，胰腺癌和乳腺癌中存在缺失。目前研究的热点集中于中枢神经系统方面，在消化道肿瘤方面的研究较少。Zhong X等 [8] 研究发现在8个结直肠癌细胞系中PCDH10基因启动子区DNA均表达沉默。Fang S等 [9] 研究了PCDH10基因DNA发生甲基化后，在肝癌中的表达下降，并发现该基因可作为肝癌的筛查基因之一。Li Z等 [10] 发现在人胃癌组织中，PCDH10表达量明显下降，且灵敏度较高，可作为筛查早期胃癌的靶点之一。Yu B等人 [11] 运用高分辨率熔解曲线技术对100例胃癌，100例结直肠癌及70例胰腺癌组织中的PCDH10基因DNA甲基化水平进行检测，发现其甲基化水平与肿瘤的发生密切相关。Yu J等人 [12] 研究发现PCDH10作为一个肿瘤抑制基因，与胃癌的不良预后有极为密切的关系。

本实验表明，在胃癌组织中，PCDH10基因启动子区域的DNA甲基化导致了其基因表达缺失，PCDH10基因的甲基化状态与胃癌的发生有密切关系，更深层次的研究需在大样本的条件下进一步深入。

基金项目

青岛市科技局基金资助项目，No. 2012-1-3 -1-(10)。

文章引用

鞠亚菲,姜相君. PCDH10基因DNA甲基化在胃癌中的研究
Research of PCDH10 DNA Methylation in Gastric Cancer[J]. 临床医学进展, 2016, 06(01): 45-49. http://dx.doi.org/10.12677/ACM.2016.61009

参考文献 (References)