 Hans Journal of Surgery 外科, 2013, 2, 23-26 http://dx.doi.org/10.12677/hjs.2013.24006 Published Online October 2013 (http://www.hanspub.org/journal/hjs.html) Research of Change of Serum Concentration of Cytokines TGF-β and VEGF in Post-Burned Hypertrophic Scar Patients* Rui Shen1, Jinming Zhang2#, Fenggang Zhang1, Yongjun Du1, Hongmei Song1, Xiaodong Chen1, Lusheng Xu1 1Department of Plastic Surgery, The Affiliated Foshan Hospital of Sun Yat-sen University, Foshan 2Department of Plastic Surgery, The Second Affiliated Hospital of Sun Yat-sen University, Guangzhou Email: shenruihaohao@163.com, #zxmrwk@126.com Received: Jun. 17th, 2013; revised: Jun. 25th, 2013; accepted: Jul. 10th, 2013 Copyright © 2013 Rui Shen et al. This is an open access article distributed under the Creative Commons Attribution License, which permits unre- stricted use, distribution, and reproduction in any medium, provided the original work is properly cited. Abstract: Objective: To explore the dose and its clinic significance of profibrotic cytokines of TGF-β and VEGF in the serum of hypertrophic scar patients at excessive stages. Methods: Serum samples of 74 inpatients were collected, who were admitted to our hospital between 2009, 8 and 2011, 8 and were suffering from post-burned hypertrophic scars at various stages. Serum samples of 12 cases of healthy persons were also collected as the control group. Hypertrophic scar groups were divided into 4 subgroups according to the phase of scars and using the ELISA method to detect the concentrations of TGF-β and VEGF in serum of the trials. Results: The doses of TGF-β and VEGF began to increase in 1 to 3 months hypertrophic scar group and achieved summit concentration in 4 to 6 months scar group. The concentra- tion of TGF-β and VEGF degreased gradually with the maturation of hypertrophic scars. Conclusion s: High concentra- tion of TGF-β and VEGF in the serum can reflect the level of metabolic activity in the tissue of hypertrophic scars. TGF-β and VEGF may be a promising marker in discerning the growth and development of hypertrophic scars. Keywords: Hypertrophic Scar; Post-Burned; Serum; Marker; TGF-β; VEGF 烧伤后增生性瘢痕患者血清中 TGF-β、VEGF的浓度检测及 意义* 沈 锐1，张金明 2#，张凤刚 1，杜永军 1，宋红梅1，陈晓东1，徐路生 1 1中山大学附属佛山医院整形外科，佛山 2中山大学附属第二医院整形外科，广州 Email: shenruihaohao@163.com, #zxmrwk@126.com 收稿日期：2013 年6月17 日；修回日期：2013年6月25 日；录用日期：2013 年7月10 日 摘 要：目的：探讨烧伤后增生性瘢痕患者血清中TGF-β、VEGF浓度变化及意义。方法：选择 2009，8 ~2011， 8我科住院的烧伤后增生性瘢痕患者共 74 例，根据创面愈合后瘢痕增生时间长短分组，分为 4组，选择 12 例 正常人作为正常对照组，共 5组。用酶联吸附法(ELISA)检测患者血清中 TGF-β、VEGF 的浓度，5组之间统计 比较分析。结果：瘢痕患者血清中 TGF-β、VEGF 含量与瘢痕增生时段关系密切，1~3 月早期瘢痕组血清中 TGF-β、 VEGF 含量开始增加，随瘢痕的发展升高，4~6 个月瘢痕组血清中TGF-β、VEGF 含量达到了高峰。随着瘢痕成 熟，TGF-β、VEGF 浓度又逐渐下降。结论：烧伤后增生性患者血清中TGF-β、VEGF 的含量可较好地反映增生 性瘢痕代谢活跃程度，是增生性瘢痕增生活跃程度敏感的标记物。 关键词：增生性瘢痕；烧伤后；血清；标记物；TGF-β；VEGF *基金项目：佛山市重点科技攻关项目(No. 200808053)；佛山卫生局项目(No. 2008054)。 #通讯作者。 Copyright © 2013 Hanspub 23  烧伤后增生性瘢痕患者血清中 TGF-β、VEGF 的浓度检测及意义 Copyright © 2013 Hanspub 24 1. 引言 增生性瘢痕(hypertrophic scar, HS)是以胶原纤维 等细胞外基质过度生成、沉积为特征的皮肤纤维化疾 病[1]。临床治疗方法多样，但是缺乏十分有效的治疗 手段。另外，目前临床上尚缺乏一种准确、可重复评 价瘢痕增生程度的指标，不利于抗瘢痕药物与方法的 疗效评价、优化与筛选，也深刻影响着瘢痕治疗的进 展。 转化生长因子 β(transforming growth factor β, TGF- β)与血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)是目前研究得比较透彻的，对瘢痕增生 起明显促进作用的细胞因子，两因子均可在瘢痕组织 局部表达、分泌，其表达的量甚至与瘢痕增生的程度 密切相关[2-5]。那么这两种瘢痕形成促进因子是否能够 分泌入血液，能不能通过检测烧伤后瘢痕患者血液中 TGF-β、VEGF 两因子的浓度来评价瘢痕增生的程度， 该实验在这方面进行了有益的探索。 2. 对象和方法 2.1. 一般资料 病例及标本的选择：选择 2009 年8月~2011，8 月期间我烧伤整形外科住院的烧伤后瘢痕患者 74例， 分属于瘢痕增生的不同时期。其中男 49例，女 25 例， 最大年龄 55岁，最小年龄 18 岁，平均年龄为 27.9 ± 13.4 岁，所有受试者均无外伤、无妊娠，无罹患其它 结缔组织疾病，亦无其它影响检测结果的局部或全身 性疾病，为了减少瘢痕面积对实验结果的影响，规定 瘢痕面积均不得大于体表面积的10%。另选 12 例健 康人群作为正常对照组，所采取的检测均获得受试者 或其家属知情同意，经医院伦理委员会审核通过。74 例瘢痕患者根据创面愈合后瘢痕增生的不同时段分 组，分为4组：1) 1 月~3 月的早期瘢痕组；2) 4 月~6 月的瘢痕组；3) 7月~12 月的瘢痕组：4) 1年以上的 接近成熟期的增生性瘢痕组。与正常对照组一起，共 为5组。检测其血清中TGF-β、VEGF 的浓度的水平。 2.2. 主要试剂和仪器 试剂盒来自于北京生物技术研究所，其它为常用 试剂。采用生物素双抗夹心酶联免疫吸附法(ELISA) 对标本血清中TGF-β、VEGF 含量进行测定。 2.3. 实验标本的制备 抽取静脉血2 ml，置干燥管，室温下静置3小时， 在3000 rpm 离心机内离心，离心 15 min。用移液管移 取血清 0.5 ml，置于离心管，标本放于−70℃超低温冰 箱内保存，待标本收集完成后，对实验标本统一进行 检测，以避免不同批次实验试剂和实验操作人员对实 验结果产生影响。 2.4. 用ELISA试剂盒对血清中 TGF-β、 VEGF 的浓度进行检测 标本解冻。标准品的稀释。根据待测样品数量决 定所需的板条数。加样：1，空白管对照孔不加样品、 生物素标记的抗 TGF- β1抗体以及链霉素亲和素- HRP，只加显色剂A＆B和终止液，其余操作相同； 2，标准品孔：加入标准品 50 µg，链霉素亲和素- HRP(标准品中已事先整合好生物素抗体，故不加)；3， 待测样品孔：加入样本40 µl，然后各加入抗TGF-β1 抗体 10 µl、链酶亲和素-HRP，盖上封板膜，轻轻振 荡混匀，37℃温育 60 分钟。配液、洗涤、显色、终 止按试剂盒要求操作。最后测定：用空白孔调零，450 nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD 值)，根据标准品 的浓度以及对应OD 值计算出保准曲线的直线方程， 再根据样品的 OD 值在回归方程上算出对应的样品浓 度。 2.5. 实验结果统计学分析 实验结果用 SPSS统计软件 13.0 进行分析。P < 0.05 认为差别有统计学意义。 3. 结果 与正常对照组比较，创面愈合后 1~3 月瘢痕组血 清中 TGF-β、VEGF 的浓度已有升高。4~6月瘢痕组 达到了最高水平，但随着增生性瘢痕的逐渐成熟，到 瘢痕趋向成熟时(1 年以上瘢痕)，TGF-β、VEGF 的浓 度又明显下降，但仍未恢复到正常水平，见表1。 4. 讨论 增生性瘢痕形成与皮肤损伤程度相关，可发生在  烧伤后增生性瘢痕患者血清中 TGF-β、VEGF 的浓度检测及意义 Table 1. Change of serum concentration of cytokines TGF-β and VEGF of post-burned hypertrophic scars at excessive stages 表1. 烧伤后不同时期增生性瘢痕血清中 TGF-β、VEGF 的浓度水平(x s µg.L−1) 组别 正常对照 1~3月瘢痕 4~6月瘢痕 7~12月瘢痕 1年以后瘢痕 每组例数 12 23 16 11 24 TGF-β浓度(µg·L−1) 463.75 12.40 638.61 46.93＊▲ 1480.83 113.85＊ 1003.94 124.32＊ 844.50 114.57▲ VEGF 浓度(µg·L−1) 734.33 10.73 887.93 15.21▲ 2605.40 108.04＊ 1646.92 86.13＊▲ 1203.08 73.85▲ 注：瘢痕各组和正常对照组比较，＊P < 0.05，结果有统计学意义。其余瘢痕组与 4~6 月瘢痕组比较，▲P < 0.05，结果有统计学意义。 身体任何部位，多见于严重烧伤、擦伤、撕脱伤等等[6]。 增生性瘢痕形成后，其外在表现实际上处在不断演进 之中，早期瘢痕颜色鲜红，质地韧，明显突出于正常 皮肤平面，但随着时间延长，瘢痕逐渐成熟，颜色变 浅，质地变软，表面充血的血管亦不复存在。据此， 临床上可以根据肉眼观察与简单的检查，如根据瘢痕 颜色、硬度、厚度、瘢痕挛缩程度及其它伴随症状， 如有无痛、痒症状等指标就可以评判瘢痕增生程度， 方便指导临床瘢痕的诊疗工作，也可将这些瘢痕简单 的指标制成量表来规范应用，其中著名的是温哥华瘢 痕量表(Vancouver scar scale, VSS)，该方法优点是简 单、易行，缺点是存在着一定主观性和随意性，临床 应用上存在一定争议，临床上，寻找更为客观的指标 来评价瘢痕增生程度实属必要[7]。 瘢痕是创伤的过度愈合，瘢痕形成与瘢痕局部细 胞因子及其信号转导途径的异常活化关系密切[8]。 TGF-β直接地通过促进瘢痕组织内成纤维细胞增殖以 及合成胶原纤维，而VEGF通过促进瘢痕内部大量的 血管增生，为瘢痕增生提供充分的氧气、营养供应， 间接地促进瘢痕胶原合成，两细胞因子均能明显地促 进瘢痕增生与形成[9]。但是瘢痕促进因子 TGF-β、 VEGF 瘢痕组织表达后能否分泌入血，瘢痕患者血液 中TGF-β与VEGF 的浓度变化与瘢痕增生时段之间的 关系是否密切，TGF-β、VEGF 两因子是否可以作为 评价瘢痕增生程度的标记物，国、内外尚未见这方面 的报道[7,10]。 实验结果显示不同时期的瘢痕组织合成的TGF- β、VEGF 能够入血全身分布，表现为患者血清中 TGF-β、VEGF 的浓度不同程度的升高，两因子的浓 度变化与瘢痕临床演进过程基本一致。1~3 月早期瘢 痕组患者血清中 TGF-β、VEGF 开始升高，临床表现 为瘢痕开始增生，4~6 月瘢痕组患者血清中TGF-β、 VEGF 的浓度达到了最高水平，这时瘢痕增生最为严 重。随着，7~12 月瘢痕组患者血清中 TGF-β、VEGF 的浓度又逐渐下降，以至于1年以后瘢痕组TGF-β、 VEGF 的浓度趋向于正常(但是不能达到正常水平)， 临床表现为瘢痕逐渐趋向成熟。实验结果表明：烧伤 创面愈合后，创面愈合调控因子异常上升，是致使烧 伤后增生性瘢痕形成重要原因，同时患者血清中 TGF- β、VEGF 是评价瘢痕增生的理想标记物。 相对于温哥华瘢痕量表，增生性瘢痕患者血清中 TGF-β、VEGF 的浓度变化能够更准确地评价瘢痕组 织胶原代谢情况以及反映患者瘢痕增生情况，可以作 为评价烧伤后增生性瘢痕增生程度较为敏感的、客观 的标记物。缺点是需要患者抽血检查，具有一定的创 伤，实验检查和结果之间有一定的时间差，同时瘢痕 患者血清中 TGF-β、VEGF 的浓度变化不但与瘢痕时 段有关，也与瘢痕面积大小等因素相关，实验结果准 确性可能受到干扰，临床应用时尚需进一步完善。如 两种方法结合使用，可弥补两者的各自不足。 瘢痕疙瘩局部切除后复发率极高，有学者提出假 说，认为在瘢痕疙瘩在形成以前，有典型的损伤后潜 伏(有时原发损伤不明显而被患者忽略)，如果第二次 触发(例如单纯的外科切除)，则会很快复发，病变常 常较前增大。该特点可比作一个免疫反射弧：最初的 接触导致致敏阶段、记忆形成和效用机制。瘢痕疙瘩 形成的第二阶段类似于第二次免疫反应。但是该假说 没能找到答案[11]。有趣的是，在临床工作中，为严重 瘢痕患者实行植皮手术时，其远离瘢痕局部供皮区瘢 痕增生往往较明显，令人困惑。该实验的结果可能有 助于解释这些假说与现象，我们的推测：瘢痕或瘢痕 疙瘩局部组织表达、分泌过量的瘢痕 TGF-β、VEGF， 并分泌入血全身分布，如果其他部位新添创伤或手 术，那么创伤或手术局部组织液体中TGF-β、VEGF 的浓度因叠加效应势必较高，瘢痕增生可能异常明 显。介导瘢痕疙瘩“免疫反应”的不是抗体，而可能 Copyright © 2013 Hanspub 25  烧伤后增生性瘢痕患者血清中 TGF-β、VEGF 的浓度检测及意义 是血液中高浓度的瘢痕促进因子 TGF-β、VEGF。因 此，我们可将身体有增生性瘢痕或瘢痕疙瘩存在看成 一种“获得的”的“瘢痕体质”，可能对身体其他部 位再发损伤形成的继发瘢痕产生不利影响。 参考文献 (References) [1] G. 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