目的:为美花石斛种苗的规模化生产提供理论依据。方法:以将继代培养的美花石斛长至0.2~0.6 cm左右的丛生芽分割外植体,分别转入不同的培养基中。研究MS培养基浓度,激素(NAA)浓度对美花石斛组培苗生根的影响。结果:MS培养基的浓度对美花石斛组培苗生根影响较大,组培苗在1/2 MS培养基中有明显的促进作用。在培养基中添加激素(NAA)对美花石斛组培苗生根有很大的促进作用,随着激素(NAA)浓度的增加,组培苗生根率越高,当NAA增加到0.7 mg/L时达到86%,再增高会出现生长缓慢,叶变枯黄。结论:当培养基配方为1/2MS + 0.7 mg/L时,美花石斛组培苗生根及生长效果最佳。<br/>Objective: The effect of different culture medium formulas on Dendrobium loddigesii root culture was studied to provide theoretical basis for the standardization production. Method: We investi-gated the effect of media components on the induction of shoot regeneration for different types of explants to research the effect on taking root for Dendrobium loddigesii. Results: The media com-ponents have a great influence on taking root. And 1/2 MS medium can obviously promote rooting. And with the increasing of NAA, the rooting rate rises. But when the NAA increased to 0.7 mg/L, and the rooting rate reached 86% and then increased again, there will be a slow growth with the leaves turning yellow. Conclusion: The best culture medium formula is 1/2 ms + 0.7 mg/L NAA for Dendrobium loddigesii to take root and grow.
周路,罗国庆,扬风,汪建华,王自布*
贵州师范学院化学与生命科学学院,贵州 贵阳
Email: 2609151292@qq.com, *xjshz_2008@sina.com
收稿日期:2015年2月20日;录用日期:2015年3月6日;发布日期:2015年3月9日
目的:为美花石斛种苗的规模化生产提供理论依据。方法:以将继代培养的美花石斛长至0.2~0.6 cm左右的丛生芽分割外植体,分别转入不同的培养基中。研究MS培养基浓度,激素(NAA)浓度对美花石斛组培苗生根的影响。结果:MS培养基的浓度对美花石斛组培苗生根影响较大,组培苗在1/2 MS培养基中有明显的促进作用。在培养基中添加激素(NAA)对美花石斛组培苗生根有很大的促进作用,随着激素(NAA)浓度的增加,组培苗生根率越高,当NAA增加到0.7 mg/L时达到86%,再增高会出现生长缓慢,叶变枯黄。结论:当培养基配方为1/2MS + 0.7 mg/L时,美花石斛组培苗生根及生长效果最佳。
关键词 :石斛,组织培养,生根培养,美花石斛
美花石斛(Dendrobium loddigesii)为兰科多年生草本植物。在《本草经》中,石斛就已被列为上品,也是我国栽培历史悠久的兰科植物之一[
美花石斛来自贵州师范学院生物实验室经过初代、继代培养的丛生芽。
实验材料选择经过初代、继代培养的0.2~0.6 cm的丛生芽,长势基本一致。接种于各组别的培养基上。实验分组分为3个大组,没个大组设置6个不同培养基配方编号,每个培养基编号可设置15个培养瓶,一个培养瓶中接入一颗丛生芽进行诱导生根培养。
本实验采用MS培养基为基础培养基,设置(1/4MS、1/2MS、3/4MS)一系列培养基,再添加一系列具梯度的激素(NAA)浓度(0~0.9 mg/L)。以上培养基蔗糖均为3%,琼脂均为1%。以上培养基均用0.2 mol/L的HCL或NaOH来调节PH值为5.8~6.2。培养基采用高压蒸汽灭菌,在0.1~0.15 Mpa压强(120℃~125℃)下保持15~30 min。如(表1)设置了18种不同的培养基配方,在随后每周观察并记录组培苗的生根情况以及生根数量。
采用250 ml的玻璃培养皿,装入20 ml左右的培养基,用配套的塑料盖盖好。
组培室中培养箱培养,培养温度23℃ ± 2℃,光照强度1500~2000 lx,光周期为12/12 h。
由表2可以看出,以1/4MS为基本培养基培养的美花石斛组培苗生长情况不是很理想,且生根率也不是较高,平均根数从1.1到2.2,根平均长度从0.6 cm到1.41 cm。生根率随着激素(NAA)的浓度增加而上升,但当激素浓度到达0.9 mg/L时,叶芽出现枯黄,表明最适NAA浓度在0.7 mg/L时到达峰值。
由表3可以看出,1/2MS培养基对美花石斛组培苗的生根有显著的影响,生根率也比较理想,随着激素(NAA)浓度的增加,美花石斛组培苗的生根数量与生根率越来越好,在NAA浓度为0.7 mg/L时,组培苗平均根数为3.9颗,根平均长度为4.55,生根率为86%,生长状况较好。随着NAA浓度的继续增加,到达0.9 mg/L时,虽然生根率等一系列指标比较理想,但组培苗叶面枯黄,不是实验的理想结果。因此,以1/2MS为基本培养基的最适激素(NAA)浓度为0.7 mg/L。
由表4可以看出,以3/4MS为基本培养基对美花石斛组培苗的影响较1/4MS,1/2MS培养基更加不是理想,整个美花石斛组培苗生长缓慢,长出的根即细小又短小,长出的根的平均长度、平均根数都比较不为理想。不能符合移栽使用。整个生根率也很差,同样有个问题为当NAA浓度达到0.9 mg/L时,组培苗的叶、芽会出现枯黄情况。
通过以上三种MS (1/4MS、1/2MS、3/4MS)培养基以及不同激素(NAA)浓度的不同对美花石斛组培苗进行分组培养,一周后均出现白点生根。但在3周过后,生长以及生根情况出现明显的差异。在一定条件下,低浓度的无机盐对美花石斛组培苗的生长有促进作用,激素(NAA)随浓度的增加对美花石斛组培苗生根有促进作用。以1/2MS + 0.7 mg/L NAA为最佳培养基,此时,美花石斛组培苗的平均根数、根平均长度以及生根率都是最好的。
我国石斛组培研究起步较晚,直到1984年,徐云鹘等[
组别 | 培养基号 | 培养基配方 |
---|---|---|
1 | S1 | 1/4MS |
S2 | 1/4MS + 0.1NAA | |
S3 | 1/4MS + 0.3NAA | |
S4 | 1/4MS + 0.5NAA | |
S5 | 1/4MS + 0.7NAA | |
S6 | 1/4MS + 0.9NAA | |
2 | S1 | 1/2MS |
S2 | 1/2MS + 0.1NAA | |
S3 | 1/2MS + 0.3NAA | |
S4 | 1/2MS + 0.5NAA | |
S5 | 1/2MS + 0.7NAA | |
S6 | 1/2MS + 0.9NAA | |
3 | S1 | 3/4MS |
S2 | 3/4MS + 0.1NAA | |
S3 | 3/4MS + 0.3NAA | |
S4 | 3/4MS + 0.5NAA | |
S5 | 3/4MS + 0.7NAA | |
S6 | 3/4MS + 0.9NAA |
表1. 18种培养基配方
NAA浓度(mg/L) | 苗数(颗) | 平均根数(颗) | 平均长度(cm) | 生根率(%) | 生长状况 |
---|---|---|---|---|---|
0 | 15 | 1.1 | 0.60 | 13.3 | 生长缓慢,根细短,生根率较小。 |
0.1 | 15 | 1.1 | 0.95 | 33.3 | 生长缓慢,根细短,生根率较小。 |
0.3 | 15 | 1.4 | 1.00 | 40.0 | 生长缓慢,根细短,生根率较小。 |
0.5 | 15 | 1.6 | 1.35 | 53.3 | 生长缓慢,根粗短,生根率较小。 |
0.7 | 15 | 1.9 | 1.40 | 60.0 | 生长一般,根粗短,生根率一般 |
0.9 | 15 | 2.2 | 1.41 | 66.7 | 生长一般,根粗短,生根率一般,叶枯黄。 |
表2. 1/4MS:不同激素(NAA)浓度对美花石斛组培苗生根的影响
因[
美花石斛组培苗适宜的生根培养基为1/2MS + 0.7 mg/L NAA。培养基蔗糖、琼脂加入量分别为3%、1%,适宜的培养基PH为5.8,适宜光照强度为2000 lx,适宜光周期为12/12 h。培育出的组培苗生长健壮,生根数较好,生根率最高,可进行移栽。
NAA浓度(mg/L) | 苗数(颗) | 平均根数(颗) | 平均长度(cm) | 生根率(%) | 生长状况 |
---|---|---|---|---|---|
0 | 15 | 1.0 | 0.88 | 26.6 | 生长缓慢,根细短,生根率较小。 |
0.1 | 15 | 1.5 | 1.26 | 40.0 | 生长缓慢,根细短,生根率较小。 |
0.3 | 15 | 2.2 | 1.82 | 46.6 | 生长一般,根细短,生根率一般。 |
0.5 | 15 | 2.6 | 2.25 | 60.0 | 生长一般,根粗长,生根率一般。 |
0.7 | 15 | 3.9 | 4.55 | 86.6 | 生长较快,根粗长,生根率高,茎段好,叶茂。 |
0.9 | 15 | 3.9 | 4.50 | 86.6 | 生长较快,生根率也高,但叶变枯黄。 |
表3. 1/2MS:不同激素(NAA)浓度对美花石斛组培苗生根的影响
NAA浓度(mg/L) | 苗数(颗) | 平均根数(颗) | 平均长度(cm) | 生根率(%) | 生长状况 |
---|---|---|---|---|---|
0 | 15 | 1.0 | 0.25 | 0.07 | 生长缓慢,根细短,生根率较小。 |
0.1 | 15 | 1.0 | 0.57 | 26.7 | 生长缓慢,根细短,生根率较小。 |
0.3 | 15 | 1.0 | 0.74 | 26.7 | 生长缓慢,根细短,生根率较小。 |
0.5 | 15 | 1.2 | 1.01 | 40.0 | 生长缓慢,根细短,生根率较小。 |
0.7 | 15 | 1.3 | 1.10 | 46.7 | 生长缓慢,根细短,生根率较小。 |
0.9 | 15 | 1.2 | 1.05 | 46.7 | 生长缓慢,根细短,生根率较小,叶变枯黄。 |
表4. 3/4MS:不同激素(NAA)浓度对美花石斛组培苗生根的影响
贵州省科技厅项目(黔科合J字[
周 路,罗国庆,扬 风,汪建华,王自布, (2015) 不同培养基配方对美花石斛生根培养的影响Effect of Different Culture Medium Formulas on Dendrobium loddigesii Rolfe Root Culture. 微生物前沿,01,6-10. doi: 10.12677/AMB.2015.41002