对野生白芨进行组培快繁研究,结果表明:1) MS + 2.5 mg∙L −16-BA + 0.2 mg∙L −1 NAA诱导效果最好,诱导率可达98%;2) MS + 2.5 mg∙L −1 IAA + 2.5 mg∙L −16-BA + 2.0 mg∙L −1 NAA诱导增殖的效果最好,培养40 d后增殖率可达3.8倍;3) 1/2 MS + 0.01 mg∙L −1 NAA +0.01 mg∙L −1 IAA有利于生根,且植株长势健壮。炼苗基质以60%腐叶土 + 30%珍珠岩 + 10%蛭石为佳;炼苗温度23℃~28℃,空气相对湿度80%~90%有利于提高炼苗成活率。 Tissue culture and rapid propagation research was done on wild bletilla. The results showed that: 1) MS + 2.5 mg∙L −16-BA + 0.2 mg∙L −1 NAA has the best induced effect, whose induction rate can reach 98%; 2) MS + IAA 2.5 mg∙L −1 + 2.5 mg∙L −16-BA +2.0 mg∙L −1 NAA has the best effect of induced proliferation, whose proliferation rate can be up to 3.8 times after 40 d culture; 3) 1/2 MS + 0.01 mg∙L −1 NAA + 0.01 mg∙L −1 IAA is conducive to take root and plants grow strong. The best rotten leaves seedling substrate consists of 60% leaf mold + 30% perlite + 10% vermiculite. The seedling survival rate can be improved in temperature of 23˚C - 28˚C and air relative humidity of 80% - 90%.
徐森富,陈海锋,陈依桃
台州科技职业学院,浙江 台州
收稿日期:2016年1月2日;录用日期:2016年1月18日;发布日期:2016年1月22日
对野生白芨进行组培快繁研究,结果表明:1) MS + 2.5 mg∙L−16-BA + 0.2 mg∙L−1 NAA诱导效果最好,诱导率可达98%;2) MS + 2.5 mg∙L−1 IAA + 2.5 mg∙L−16-BA + 2.0 mg∙L−1 NAA诱导增殖的效果最好,培养40 d后增殖率可达3.8倍;3) 1/2 MS + 0.01 mg∙L−1 NAA +0.01 mg∙L−1 IAA有利于生根,且植株长势健壮。炼苗基质以60%腐叶土 + 30%珍珠岩 + 10%蛭石为佳;炼苗温度23℃~28℃,空气相对湿度80%~90%有利于提高炼苗成活率。
关键词 :野生白芨,组织培养,增殖,驯化
白芨(Bletilla striata)是兰科白芨属的一种多年生草本植物。又名为白根、地螺丝、白鸡儿、白鸡娃等。株高30~60厘米。块茎肉质,白色,具2~3叉呈菱角状,有须根,常数个并生,总状花序顶生,常有花3~8朵;花淡紫红色,花瓣不整齐。蒴果圆柱形,上有6条纵棱,两端稍尖。种子细小,多数。花期4~5月,果期7~8月。地下有粗厚的根状茎,如鸡头状,富粘性,含白芨胶质,即白芨甘露聚糖,可供药用,有止血补肺、生肌止痛之效,也可供作糊料,花美丽,也可供观赏 [
白芨材料全部来自浙江省温岭市华翰白芨专业合作社,品种为野生白花白芨(Bletilla striata (Thunb.) Reichb. f. var. alba Hort)。
1) 预处理用肥皂水和软毛刷将白芨果荚表面清洗干净,然后用自来水冲洗10 min,每个果荚修理好备用。
2) 乙醇消毒在超净工作台上将果荚移入无菌瓶,倒入75%的乙醇浸没材料,轻摇1 min后倒出乙醇,用无菌水冲洗1次。
3) HgCl2消毒用0.1% HgCl2浸没上述材料,轻摇6~8 min后倒出HgCl2液。
4) 无菌水清洗注入无菌杯适量的无菌水,晃动数次将水倒掉,如此重复5次,无菌纸吸干材料水分备用。
以MS为基本培养基(含蔗糖3%,琼脂0.7%,pH为5.7),并附加NAA和6-BA及IAA不同浓度组合的激素,制好后分装入150 mL组培瓶灭菌冷却待用 [
选品性表现良好的植株,做上标记,然后对其进行外围杀菌处理。
在晴天采取健康白芨果荚,进行清洗和消毒处理,将已消毒的果荚内的种子用镊子取出放入诱导培养基,进行芽诱导培育 [
将诱导出的白芨幼苗接种到MS并附加NAA和6-BA不同浓度组合的培养基上进行培养。M1、M2、M3、M4分别为1.5 mg∙L−1 6-BA + 0.2 mg∙L−1 NAA、2.0 mg∙L−1 6-BA + 0.2 mg∙L−1 NAA、2.5 mg∙L−1 6-BA + 0.2 mg∙L−1 NAA、3.0 mg∙L−1 6-BA + 0.2 mg∙L−1 NAA。实验结果表明(见表1),以MS + 2.5 mg∙L−1 6-BA + 0.2 mg∙L−1 NAA诱导效果最好这一组合的培养基为最适,诱导率可达98%;接种5 d后,幼苗开始生长,25 d后长至2~2.5 cm。
将已诱导出来的幼苗从植株分离,将其接种至增殖培养基中,M5、M6、M7、M8、M9、M10、M11、M12分别为不同IAA、6-BA与NAA激素组合(见表2)。试验结果表明以MS + 2.5 mg∙L−1 IAA + 2.5 mg∙L−1 6-BA + 2.0 mg∙L−1 NAA这一组合的培养基为最适,芽生长健壮,增殖达到3.8倍 [
将经过增殖出来的幼苗放入生根培养基,经过生根培育使其达到完整植株的成苗为止,要求苗壮根肥为标准。M13、M14、M15、M16分别为不同NAA与IAA激素组合(见表3),试验结果表明以1/2 MS + 0.01 mg∙L−1 NAA + 0.01 mg∙L−1 IAA这一组培养基为最适,生根质量较好。
处理 | 接种数 | 出芽数 | 出芽率(%) |
---|---|---|---|
M1 | 50 | 36 | 72 |
M2 | 50 | 46 | 92 |
M3 | 50 | 49 | 98 |
M4 | 50 | 42 | 84 |
表1. 不同培养基对幼芽诱导影响
处理 | 接种数 | 增殖数 | 增殖倍数 |
---|---|---|---|
M5 | 50 | 70 | 1.4 |
M6 | 50 | 75 | 1.5 |
M7 | 50 | 135 | 2.7 |
M8 | 50 | 165 | 3.3 |
M9 | 50 | 180 | 3.6 |
M10 | 50 | 190 | 3.8 |
M11 | 50 | 185 | 3.7 |
M12 | 50 | 155 | 3.1 |
表2. 不同培养基对幼苗分化影响
处理 | 接种数 | 生根数 | 生根率(%) |
---|---|---|---|
M13 | 50 | 41 | 82 |
M14 | 50 | 45 | 90 |
M15 | 50 | 44 | 88 |
M16 | 50 | 42 | 84 |
表3. 不同培养基对幼苗生根影响
处理 | 成活率(%) | 新抽叶数(片) | 叶宽(cm) |
---|---|---|---|
蛭石 | 80 | 3.75 | 0.60 |
珍珠岩 | 75 | 3.67 | 0.59 |
草炭土 + 蛭石 | 90 | 3.80 | 0.63 |
草炭土 + 珍珠岩 | 85 | 3.51 | 0.61 |
草炭土 + 蛭石 + 珍珠岩 | 96 | 3.95 | 0.65 |
表4. 不同基质对驯化苗影响
将已生根的完整健康植株从组培瓶中移栽出来,在大棚内进行驯化,然后炼苗种植。在炼苗期间,应严格控制温湿度,防治病虫害。
当生根苗长出发达根系,株高达3~4 cm时,移入温室打开瓶口,保持3 d,洗净根系上的培养基,移入72穴育苗盘,基质配比为草炭土:珍珠岩:蛭石(1:1:1) (见表4)。将育苗盘置于小荫棚培养,2周后根系长满,撤去荫棚,移入10cruxl0em营养钵,成活率达96%。
初代培养中将培养茎段上长出的新芽切下用于继代培养后,若原茎段还没有枯干时,将其重新接入新的培养基中,20 d后可从切口处长出1~3个新芽,这样可在短期内迅速建立大量无性系 [
在 MS培养基的基础上对影响白芨生长因素进行了试验,结果表明在不同光照时长白芨原球茎生长影响较大,随着光照时间的延长,白芨原球茎生长量也随着增长,当光照时间不足时白芨原球茎出现白化现象,甚至死亡 [
在白芨组织培养快繁过程中,细胞分裂素BA和生长素NAA均可促进原球茎的诱导和增殖,培养基中激素种类和浓度对白芨增殖有很大影响。6-BA和NAA同时影响白芨丛生芽的增殖,NAA对增殖的影响大于6-BA,是白芨丛生芽增殖的主导因子。对野生白芨进行组培快繁研究结果表明:MS + 2.5 mg∙L−1 6-BA + 0.2 mg∙L−1 NAA诱导效果最好;MS + 2.5 mg∙L−1 IAA + 2.5 mg∙L−1 6-BA + 2.0 mg∙L−1 NAA诱导增殖的效果最好;1/2 MS + 0.01 mg∙L−1 NAA + 0.01 mg∙L−1 IAA生根效果最好。炼苗基质以60%腐叶土 + 30%珍珠岩 + 10%蛭石为佳;炼苗温度23℃~28℃,空气相对湿度80%~90%有利于提高炼苗成活率。
2015年度浙江省大学生科技创新项目(2015R463001)。
徐森富,陈海锋,陈依桃. 野生白芨种苗快繁与驯化试验研究Experimental Research on Rapid Propagation and Domestication of Wild Bletilla Seedling[J]. 植物学研究, 2016, 05(01): 34-38. http://dx.doi.org/10.12677/BR.2016.51006