文章建立了气相色谱-串联四极级杆质谱法测定3-硝基苯磺酸甲酯、3-硝基苯磺酸乙酯的方法,采用多反应监测(MRM)模式,有效地降低基质干扰,在0.05~1 µg/mL的范围内,两种目标物的线性相关系数都在0.99以上,通过方法精密度及准确度实验,样品在两个加标浓度水平下准确度均在95.0%~110.0%之间、方法精密度在1.5%~3.0%之间,准确度及精密度良好,该方法能完全满足盐酸兰地洛尔杂质中的3-硝基苯磺酸甲酯、3-硝基苯磺酸乙酯的检测。 Analysis method of 3-sulfonic acid methyl ester and 3-sulfonic acid ethyl ester in Landiolol Hy-drochloride were established in this work. Multiple reaction monitoring was used to reduce the interference of the matrix and increase the sensitivity of the method. The linear correlation coeffi-cients of two target compounds were all above 0.99 in the concentration range of 0.05 µg/ml to 1 µg/ml. The recoveries of samples with two standard additions ranged from 95.0% to 110.0%. The precision (RSD%, n = 6) of the method was between 1.5% and 3.0%. The method was able to ana-lyze 3-sulfonic acid methyl ester and 3-sulfonic acid ethyl ester in Landiolol Hydrochloride.
宁凡盛,王珊珊,李磊,林云良,王晓利,陈相峰*
山东省分析测试中心,山东 济南
收稿日期:2017年3月26日;录用日期:2017年4月13日;发布日期:2017年4月17日
文章建立了气相色谱-串联四极级杆质谱法测定3-硝基苯磺酸甲酯、3-硝基苯磺酸乙酯的方法,采用多反应监测(MRM)模式,有效地降低基质干扰,在0.05~1 µg/mL的范围内,两种目标物的线性相关系数都在0.99以上,通过方法精密度及准确度实验,样品在两个加标浓度水平下准确度均在95.0%~110.0%之间、方法精密度在1.5%~3.0%之间,准确度及精密度良好,该方法能完全满足盐酸兰地洛尔杂质中的3-硝基苯磺酸甲酯、3-硝基苯磺酸乙酯的检测。
关键词 :气相色谱-串联四级杆质谱,多反应监测,精密度,准确度,适用性
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肾上腺素β1受体阻断药主要用于处理高血压冠心病以及心律失常等 [
本实验运用Agilent 7890A-7000B (GC-QQQ)气相色谱-串联四极级杆质谱仪;气相色谱条件:色谱柱为HP-5ms (30 m × 250 µm × 0.25 µm),柱温箱升温程序为:50℃以10℃/min升至220℃保持1 min,再以每分钟30℃升至280℃保持5 min。进样口温度300℃。采用脉冲不分流进样模式。载气使用高纯氦气,流速为1.0 mL/min。进样体积为1.0 μL。
质谱条件:采集模式用多反应监测(MRM)模式;离子源温度为230℃。各杂质组分质谱定量/定性离子见表1。
配制储备溶液:稀释溶剂使用色谱级N,N-二甲基甲酰胺。
对照品溶液:精密称定3-硝基苯磺酸甲酯标样(辰欣药业股份有限公司提供,批号:20140914) 10.2 mg,置10 mL棕色容量瓶中,N,N-二甲基甲酰胺稀释定容,得1.02 mg/mL标准溶液;精密称定3-硝基苯磺酸
化合物 | 结构式 | 保留时间(min) | 定性离子(m/z) | 碰撞能(eV) | 定量离子(m/z) | 碰撞能(eV) |
---|---|---|---|---|---|---|
3-硝基苯磺酸甲酯 | 14.687 | 217/217 | 0 | 217/123 | 2 | |
3-硝基苯磺酸乙酯 | 15.285 | 186/122 | 5 | 186/92 | 5 |
表1. 3-硝基苯磺酸甲酯、3-硝基苯磺酸乙酯的质谱参数
乙酯标样(辰欣药业股份有限公司提供,批号:20140915) 10.1 mg,置10 mL棕色容量瓶中,N,N-二甲基甲酰胺稀释定容,得1.01 mg/mL标准溶液。各精密量取上述储备液标准溶液各1.0 mL置于10 mL容量瓶中,N,N-二甲基甲酰胺稀释至刻度,摇匀后得100 µg/mL混合标准储备溶液A。
供试品溶液:取盐酸兰地洛尔试样约300 mg,精密称定,置于10 mL棕色容量瓶中,N,N-二甲基甲酰胺稀释定容,摇匀后超声5分钟,作为供试品溶液待测。
1) 空白溶剂:N,N-二甲基甲酰胺,待测。
2) 空白样品溶液:精密称定空白样品300.1 mg,置10 mL量瓶中,N,N-二甲基甲酰胺稀释定容,作为空白样品溶液,待测。
3) 3-硝基苯磺酸甲酯定位溶液:直接取浓度为1 mg/mL的3-硝基苯磺酸甲酯标准溶液1.0 mL于1.5 mL安捷伦进样瓶中,待测。
4) 3-硝基苯磺酸乙酯定位溶液:直接取浓度为1 mg/mL的3-硝基苯磺酸乙酯标准溶液1.0 mL于1.5 mL安捷伦进样瓶中,待测。
5) 空白样品加混标溶液:准确称取盐酸兰地洛尔样品300 mg,置于10 mL容量瓶中,准确加入浓度为100 µg/mL的标准溶液1.0 mL,稀释定容。摇匀后超声5分钟,作为空白样品加标溶液,待测。
分别精密量取上述溶液各1.0 µL注入气相色谱串联质谱联用仪,记录总离子流图,结果见表2。
取3-硝基苯磺酸甲酯、3-硝基苯磺酸乙酯对照品溶液A适量,逐级稀释配置成浓度分别为1.0 µg/mL (对照品溶液B)、0.5 µg/mL (对照品溶液C)、0.2 µg/mL (对照品溶液D)、0.1 µg/mL (对照品溶液E)、0.05 µg/mL (对照品溶液F)的3-硝基苯磺酸甲酯、3-硝基苯磺酸乙酯混合标准曲线溶液。相同方法,分别配制三条线性混合标准曲线溶液。
精密量取上述溶液各1.0 µL注入气相色谱-串联四级杆质谱仪,记录峰面积。以目标物杂质浓度为横坐标,以相应目标物峰面积为纵坐标做回归曲线,三条线性平均值计算回归方程及相应的线性回归系数。线性关系良好,相关系数均大于0.99。分别精密量取浓度为1.0 mg/mL的对照品储备液,逐级稀释各对
样品名称 | 硫酸二甲酯 | 硫酸二丁酯 |
---|---|---|
空白溶剂 空白样品 定位溶液出峰时间(min) 加标溶液出峰时间(min) | / / 14.70 14.71 | / / 15.29 15.30 |
表2. 专属性试验结果
照品储备液,逐级精密量取稀释后溶液1.0 µL,上机分析,当对照品浓度稀释至其信噪比(S/N)约在10~15左右时即为仪器定量限,其信噪比(S/N)约在3~5时左右即为仪器检出限。以称取0.3 g样品计定容至10 mL计方法检出限、定量限。结果见表3。
由于样品中未检出各杂质,取盐酸兰地洛尔样品300.0 mg,置10 mL量瓶中,精确加入对照品溶液A,稀释配制浓度为0.2 µg/ml试品溶液,平行测定6次,计算RSD%,结果见表4。方法精密度相对标准偏差在1.5%~3.0%之间,精密度良好。
空白样品溶液:精密称定盐酸兰地洛尔样品300.0 mg,置于10 mL量瓶中,加稀释溶剂至刻度,摇匀后超声5分钟,作为空白样品溶液。平行制备3份。
加样回收率试验溶液:精密称定盐酸兰地洛尔样品300.0 mg,分别置于10 mL量瓶中,分别加入混标对照品溶液A,稀释配制浓度为0.2 µg/mL及0.5 µg/mL的加样回收率试验溶液。每个浓度平行制备3份。
精密量取上述供试品溶液1.0 µL注入气相色谱-串联四级杆质谱仪,记录离子流图。结果见表5。可以看出样品在两个加标浓度水平下准确度均在95.0%~110.0%之间,准确度良好。
1) 对照品溶液稳定性
制备浓度为200 ng/mL的对照品溶液,分别于室温放置0小时、2小时、4小时、8小时和12小时、24小时,精密量取1.0 μL注入气相色谱-串联四级杆质谱仪,记录各杂质的峰面积。结果见表6。
2) 供试品溶液稳定性
由于样品溶液中无目标物检出,两种化合物存在不同程度的不稳定性,所以设定考察5个小时内3-硝基苯磺酸甲酯、3-硝基苯磺酸乙酯的稳定性。参照样品加标溶液的制备方法制备一份200 ng/mL的加标溶液,分别于室温放置0小时、1小时、2小时、3小时和4小时、5小时,精密量取1.0 μL注入气相色谱-串联四级杆质谱仪,记录各杂质的离子流图,结果见表6。由表可以看出,对照品溶液在室温放置下3-硝基苯磺酸甲酯8个小时内衰减不明显,24小时后衰减25.9%;3-硝基苯磺酸乙酯衰减较慢,24小时后衰减7.29%。两种化合物均存在不同程度的不稳定性,实验过程中应现用现配。
取待测盐酸兰地洛尔试样3批,按上述方法检测,每批样品平行测定3次,测定结果见表7。标准样品总离子流色谱图见图1所示。
采用气相色谱-串联四级杆质谱法多反应监测模式测定盐酸兰地洛尔杂质3-硝基苯磺酸甲酯、3-硝基
化合物 | 线性范围 (µg/mL) | 回归方程 | 仪器检出限(ng/mL) | 仪器定量限(ng/mL) | 方法检出限 (µg/mL) | 方法定量限 (µg/mL) |
---|---|---|---|---|---|---|
3-硝基苯磺酸甲酯 | 0.1~1 | y = 2938x − 167.94; R2 = 0.9958 | 30 | 65 | 1 | 2.2 |
3-硝基苯磺酸乙酯 | 0.1~1 | y = 13017x − 832.54; R2 = 0.9921 | 25 | 50 | 0.8 | 1.8 |
表3. 线性范围、回归方程、检出限及定量限
编号 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 平均值 | RSD% |
---|---|---|---|---|---|---|---|---|
3-硝基苯磺酸甲酯 (200 ng/mL) | 206.60 | 206.55 | 207.26 | 203.60 | 199.22 | 201.66 | 204.15 | 1.58 |
3-硝基苯磺酸乙酯 (200 ng/mL) | 223.73 | 217.01 | 226.92 | 230.02 | 216.37 | 216.36 | 221.57 | 2.79 |
表4. 方法精密度试验
相对浓度 | 样品 序号 | 3-硝基苯磺酸甲酯加入量(ng/mL) | 3-硝基苯磺酸甲酯测得量(ng/mL) | 准确度% | 3-硝基苯磺酸乙酯加入量(ng/mL) | 3-硝基苯磺酸乙酯测得量(ng/mL) | 准确度% |
---|---|---|---|---|---|---|---|
空白 | 1 | / | N. D. | / | / | N. D. | / |
2 | / | N. D. | / | / | N. D. | / | |
3 | / | N. D. | / | / | N. D. | / | |
200 ng/mL | 1 | 200 | 200.42 | 100.21 | 200 | 218.83 | 109.41 |
2 | 200 | 193.18 | 96.59 | 200 | 204.83 | 102.41 | |
3 | 200 | 205.23 | 102.62 | 200 | 215.30 | 107.65 | |
500 ng/mL | 1 | 500 | 506.43 | 101.29 | 500 | 491.46 | 98.29 |
2 | 500 | 496.75 | 99.35 | 500 | 501.38 | 100.28 | |
3 | 500 | 501.02 | 100.20 | 500 | 494.43 | 98.89 |
表5. 方法准确度试验
溶液 | 化合物 | 0 (h) | 2 (h) | 4 (h) | 8 (h) | 12 (h) | 24 (h) | 平均值 | RSD% |
---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
对照品溶液 | 3-硝基苯磺酸甲酯 (200 ng/mL) | 193.23 | 187.18 | 188.07 | 176.42 | 188.90 | 148.09 | 180.93 | 9.28 |
3-硝基苯磺酸乙酯 (200 ng/mL) | 200.92 | 194.75 | 196.45 | 197.17 | 197.60 | 184.08 | 195.16 | 2.97 | |
供试品溶液 | 3-硝基苯磺酸甲酯 (200 ng/mL) | 212.04 | 200.55 | 199.70 | 209.54 | 203.81 | 209.94 | 205.93 | 2.56 |
3-硝基苯磺酸乙酯 (200 ng/mL) | 216.71 | 204.53 | 219.01 | 199.20 | 199.81 | 213.20 | 208.74 | 4.16 |
表6. 溶液稳定性试验
样品编号 | 取样量(g) | 3-硝基苯磺酸甲酯(μg/mL) | 3-硝基苯磺酸乙酯(μg/mL) |
---|---|---|---|
1 | 301.3 | <1.0 (未检出) | <0.8 (未检出) |
2 | 302.1 | <1.0 (未检出) | <0.8 (未检出) |
3 | 299.8 | <1.0 (未检出) | <0.8 (未检出) |
4 | 298.6 | <1.0 (未检出) | <0.8 (未检出) |
5 | 301.2 | <1.0 (未检出) | <0.8 (未检出) |
6 | 304.3 | <1.0 (未检出) | <0.8 (未检出) |
7 | 298.9 | <1.0 (未检出) | <0.8 (未检出) |
8 | 303.7 | <1.0 (未检出) | <0.8 (未检出) |
9 | 302.3 | <1.0 (未检出) | <0.8 (未检出) |
表7. 实际样品检测
图1. 3-硝基苯磺酸甲酯、3-硝基苯磺酸乙酯的色谱图
苯磺酸乙酯,方法检出限分别为1 μg/mL、0.8 μg/mL,仪器限检出限分别为30 ng/mL、25 ng/mL在0.05~1 μg/mL的线性范围内,线性关系良好,该方法精密度在1.5%~3.0%之间,溶液稳定性良好,该方法可以用于盐酸兰地洛尔杂质3-硝基苯磺酸甲酯、3-硝基苯磺酸乙酯的检测。
山东省自然科学基金(批准号:ZR2012BQ009)。
宁凡盛,王珊珊,李 磊,林云良,王晓利,陈相峰. 盐酸兰地洛尔原料药中基因毒性杂质的定量分析方法研究 Validation of Analysis Method of 3-Sulfonic Acid Methyl Ester and 3-Sulfonic Acid Ethyl Ester in Landiolol Hydrochloride[J]. 分析化学进展, 2017, 07(02): 60-66. http://dx.doi.org/10.12677/AAC.2017.72008