目的:探讨晚期肺腺癌中TTF-1和TS的表达与培美曲塞化疗疗效的关系。方法:回顾性分析80例接受培美曲塞化疗的晚期肺腺癌患者的临床病理资料。免疫组织化学法检测肿瘤标本TTF-1和TS蛋白的表达,并对疗效进行分析。结果:TTF-1阳性表达率为71.25% (57/80),TS阳性表达率为22.50% (18/80)。TTF-1和TS在肺癌中的表达呈负相关性(r = −0.356,P = 0.002)。化疗有效率(CR + PR)为46.25%,TTF-1(+)患者有效率(64.91%)显著高于TTF-1(−)患者(39.13%),差异有显著性(P < 0.05)。TS(+)患者有效率(27.78%)显著低于TS(−)患者51.61%,差异有显著性(P < 0.05)。联合检测显示:TTF-1(−)且TS(+)组有效率为28.57%,中位无疾病进展时间为3.9个月,1年生存率为28.6%,TTF-1(+)且TS(−)组有效率为81.13%,中位无疾病进展时间为7.4个月,1年生存率为69.8%,差异均有显著性(P < 0.05)。结论: 联合检测TTF-1和TS的表达可作为培美曲塞化疗方案治疗晚期肺腺癌的疗效预测指标之一。 Objective: To investigate the relationship between expression of TTF-1, TS and chemotherapy effect of pemetrexed in advanced lung adenocarcinoma. Methods: Eighty patients with advanced lung adenocarcinoma treating by pemetrexed were enrolled in this study and their tumor samples were collected retrospectively for analysis. The expression of TTF-1, TS protein in tumor samples was de-tected by the immunohistochemical method. The data of therapeutical effect and toxicity were col-lected and analyzed. Results: The TTF-1 positive staining accounted for 71.25% (57/80). The TS positive staining accounted for 22.50% (18/80). TTF-1 and TS expression in lung cancer tissues had negative correlation (r = −0.356, P = 0.002). The response rate (CR + PR) was 46.25%. The efficiency of patients with over-expression of TTF-1 (64.91%) was significant higher than patients with low-expression of TTF-1 (39.13%) (P < 0.05). The efficiency of patients with over-expression of TS (27.78%) was significant lower than patients with low-expression of TS (51.61%) (P < 0.05). The ef-ficiency, median progress time and 1-survival rate of patients with over-expression TS and low-expression of TTF-1 (28.57%, 3.9 months, 28.6%) were all significant lower than patients with over-expression TTF-1 and low-expression of TS (81.13%, 7.4 months, 69.8%) (P < 0.05). Conclu-sions: The expression of TTF-1 and TS is associated with chemotherapy effect of pemetrexed in ad-vanced lung adenocarcinoma and can be used to detect the sensitivity.
朱林佳,上官宗校,慈晓,原少斐*,赵仁国
温州医科大学附属第三医院呼吸内科,浙江 温州
收稿日期:2017年12月22日;录用日期:2018年1月5日;发布日期:2018年1月12日
目的:探讨晚期肺腺癌中TTF-1和TS的表达与培美曲塞化疗疗效的关系。方法:回顾性分析80例接受培美曲塞化疗的晚期肺腺癌患者的临床病理资料。免疫组织化学法检测肿瘤标本TTF-1和TS蛋白的表达,并对疗效进行分析。结果:TTF-1阳性表达率为71.25% (57/80),TS阳性表达率为22.50% (18/80)。TTF-1和TS在肺癌中的表达呈负相关性(r = −0.356,P = 0.002)。化疗有效率(CR + PR)为46.25%,TTF-1(+)患者有效率(64.91%)显著高于TTF-1(−)患者(39.13%),差异有显著性(P < 0.05)。TS(+)患者有效率(27.78%)显著低于TS(−)患者51.61%,差异有显著性(P < 0.05)。联合检测显示:TTF-1(−)且TS(+)组有效率为28.57%,中位无疾病进展时间为3.9个月,1年生存率为28.6%,TTF-1(+)且TS(−)组有效率为81.13%,中位无疾病进展时间为7.4个月,1年生存率为69.8%,差异均有显著性(P < 0.05)。结论: 联合检测TTF-1和TS的表达可作为培美曲塞化疗方案治疗晚期肺腺癌的疗效预测指标之一。
关键词 :肺腺癌,培美曲塞,甲状腺转录因子-1,胸苷酸合成酶
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肺癌是目前世界范围内发病率和死亡率最高的肿瘤,寻找高效的治疗方法一直是各国研究的重点。肺癌中的非小细胞肺癌近年来随着靶向药物、免疫抑制点阻断药物的开发,疗效和总生存有了长足的进展。然而对于无EGFR、ALK、ROS等相关基因突变或PD-1低表达的晚期非小细胞肺癌,化疗仍是标准的一线治疗,尤其病理类型最高的肺腺癌,培美曲塞为基础的方案是首选化疗方案 [
1) 研究对象
收集我院2012年1月~2016年6月共80例晚期肺腺癌患者。年龄33~78岁,中位年龄55岁。其中男性44例,女性36例;临床ⅢB期34例,Ⅳ期46例。病理组织分型按WHO组织学分类(1998)标准,分期按1997年国际抗癌联盟(UICC)制订的标准。所有入组患者均符合以下条件:① 均经病理学证实(手术、支气管镜检,纵隔镜活检,淋巴结切取,CT定位经皮穿刺活检)为晚期非小细胞癌,② 既往未接受过放化疗及无相关驱动基因突变,③ Karnofaky评分 ≥ 70,预计生存期 > 3个月,④ 有客观观察指标可评价疗效,⑤ 血常规、肝肾功、心电图正常,无化疗禁忌症。
2) 化疗方案
培美曲塞500 mg/m2,静脉滴注15 min,dl;顺铂总量75 mg/m2分2~3天静脉滴注。21天为一个周期,至少化疗2个周期。为预防培美曲塞不良反应,使用本品前每天补充叶酸400 ug至少连续5天,前一天补充维生素B12 1000 ug,前一天开始口服地塞米松片4 mg/bid,连续3天。常规给予5HT3受体拮抗剂预防恶心、呕吐。
3) 免疫组化方法
采用免疫组织化学链菌素亲生物素–过氧化物酶法(SP法)染色,SP试剂盒购于北京中山生物技术有限公司,羊抗鼠TTF-1、TS多克隆抗体购于武汉博士德生物工程有限公司。
将待检标本切片后经二甲苯及梯度乙醇脱蜡至水,3% H2O2作用15 min,以阻断内源性过氧化物酶活性;切片置10 m∙mol/L柠檬酸缓冲液中微波加热以修复抗原;冷却后滴加山羊血清封闭液,室温孵育15 min,封闭非特异性抗体。倾去多余血清,加入一抗,4℃过夜。滴加生物素标记羊抗鼠IgG、辣根过氧化物酶–链霉菌卵白素工作液,室温孵育各15 min,DAB显色,苏木素复染,脱水,封片。每种抗体均设阳性和阴性对照,阳性对照为已知表达阳性的组织切片,阴性对照以PBS代替一抗。
4) 结果判断
TTF-1、TS分别以胞核或胞质中出现棕色或棕黄色颗粒为阳性细胞。按半定量积分法判断两者表达 [
5) 疗效评价
化疗2周期结束后进行疗效评价,随访时间为1年。按RECIST实体瘤疗效评价标准分为:完全缓解(CR),部分缓解(PR),疾病稳定(SD),疾病进展(PD)。以CR + PR计算客观有效率。并分析患者中位疾病进展时间及1年生存率。
6) 统计学分析
应用SPSS 13.0统计软件包,TTF-1和TS表达与化疗有效率采用χ2检验;二者相关性采用Spearman等级相关性分析,以P < 0.05为有统计学意义。预计生存分析采用Kaplan-Meier曲线法,用Log-rank检验生存率。
1) 免疫组织化学染色结果
80例晚期肺腺癌标本组织中TTF-1阳性表达率为71.25% (57/80),其中男性为70.45%,女性为72.22%;≥55岁为69.77%,<55岁为72.97%;上述均经χ2检验,无统计学意义(P > 0.05);而ⅢB期肺腺癌TTF-1表达率为82.35%,Ⅳ期肺腺癌TTF-1表达率为63.04%,两者差异有统计学意义(P < 0.05)。
TS阳性表达率为22.50% (18/80),其中男性为22.73%,女性为22.22%;≥55岁为23.26%,<55岁为21.62%;上述均经χ2检验,无统计学意义(P > 0.05);而ⅢB期肺腺癌TS表达率为14.71%,Ⅳ期肺腺癌TS表达率为28.26%,两者差异有统计学意义(P < 0.05)。见图1~4和表1。
2) 化疗疗效
本组病例2例CR,35例PR,30例SD,13例PD,总有效率为46.25% (37/80)。其中,TTF-1(+)的患者有效率高(64.91%),TTF-1(−)患者有效率低(39.13%),差异有显著性(P < 0.05)。TS(+)组的有效率为27.78%,低于TS(−)组的51.61%,差异有显著性(P < 0.05)。联合检测显示:TTF-1(+)且TS(−)组有效率为81.13%,TTF-1(−)且TS(+)组有效率为28.57%,两者差异显著(P < 0.05)。见表2,表3。
3) 肺腺癌中TTF-1和TS的相关性
TTF-1和TS共同表达阳性者为4例,共同表达阴性者为9例,TTF-1表达阳性、TS表达阴性者53例,TTF-1表达阴性,TS表达阳性者14例,经Spearman等级相关分析可知两者表达呈负相关性(r = −0.356,P = 0.002)。
4) 生存情况
所有患者均获随访,随访率100%,随访时间1年。TTF-1(−)TS(+)组的中位疾病无进展期为3.9个月,1年生存率为28.6%,TTF-1(+)TS(−)组的中位疾病无进展期为7.4个月,1年生存率为69.8%,差异均有显著性(P < 0.05),见图5,因患者疗效评价进展后的治疗方法各异,我们未对总生存期进行统计。
例数 | TTF-1的表达 | TS表达 | χ2 | P | |||
---|---|---|---|---|---|---|---|
临床特征 | n | 阳性 | 阴性 | 阳性 | 阴性 | ||
性别 | 0.793 | >0.05 | |||||
男 | 44 | 31 | 13 | 10 | 34 | ||
女 | 36 | 26 | 10 | 8 | 28 | ||
年龄 | 0.825 | >0.05 | |||||
<55 | 37 | 27 | 10 | 8 | 29 | ||
≥55 | 43 | 30 | 13 | 10 | 33 | ||
分期 | 9.422 | <0.05 | |||||
ⅢB | 34 | 28 | 6 | 5 | 29 | ||
Ⅳ | 46 | 29 | 17 | 13 | 33 |
表1. 80例患者组织中TTF-1与TS的表达情况
PD | SD | PR | CR | RR | χ2 | P | |
---|---|---|---|---|---|---|---|
TTF-1 | |||||||
+ | 9 | 20 | 26 | 2 | 64.91 | 11.337 | <0.05 |
− | 4 | 10 | 9 | 0 | 39.13 | ||
TS | |||||||
+ | 4 | 9 | 5 | 0 | 27.78 | 7.464 | <0.05 |
− | 9 | 21 | 30 | 2 | 51.61 |
表2. TTF-1与TS的表达与疗效之间的关系
疗效 | n | PD | SD | PR | CR | RR | χ2 | P |
---|---|---|---|---|---|---|---|---|
蛋白表达 | 14.163 | <0.05 | ||||||
TTF-1(+)TS(−) | 53 | 6 | 5 | 40 | 2 | 81.13 | ||
TTF-1(+)TS(+) | 4 | 1 | 1 | 2 | 0 | 50.00 | ||
TTF-1(−)TS(+) | 14 | 5 | 5 | 4 | 0 | 28.57 | ||
TTF-1(−)TS(−) | 9 | 2 | 3 | 4 | 0 | 44.45 |
表3. 化疗疗效与临床病理之间的关系
图1. 肺癌中TTF-1的高表达(SP × 200)
图2. 肺癌中TS的高表达(SP × 200)
图3. 肺癌中TTF-1的低表达(SP × 200)
图4. 肺癌组织中TS的低表达(SP × 200)
图5. 患者累计生存情况
肺癌目前是世界上最常见的恶性肿瘤,在恶性肿瘤相关死亡原因中占第一位。非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)占所有肺癌的80%至85%,其中腺癌约30%~35%。多数NSCLC确诊时已处于晚期,中位生存期为1年左右,5年生存率不足16%,预后极差。即使早期可以手术的患者,仍有多数患者在5年内出现肿瘤复发或转移 [
TTF-1的研究始于通过动物实验发现TTF-1可以调节甲状腺球蛋白基因的特异性表达,为甲状腺球蛋白的特异性转录因子,从而命名为甲状腺转录因子-1。TTF-1也称为NKX同源框-1 (NK2 homeobox 1, NKX2-1),是NKX2转录基因家族的成员之一。TTF-1位于人类染色体14q13.3,由三个外显子和两个内含子组成的单基因编码的含有一个同源结构域的转录因子。TTF-1编码的蛋白含有371个氨基酸,是相对分子量为38 kDa的核蛋白,生理情况分布于甲状腺、呼吸道上皮的II型Clara细胞及部分大脑前腹侧核等,调控甲状腺、肺和中枢神经系统中基因的选择性表达 [
目前关于TTF-1是否影响肺癌的预后的研究已经开展,但是在TTF-1阳性表达与生存的关系存在很大的分歧。Winslow等 [
TS是一种叶酸依赖性酶,由两个相同的亚基构成,是DNA合成的关键酶,也是培美曲塞、5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil, 5-FU)为基础化疗的靶向酶。TS是体内调节四种核苷酸数量平衡的关键酶,TS通过甲基化脱氧尿嘧啶核苷酸(deoxyuridinemo nophosphate, dUMP)形成脱氧胸嘧啶核苷酸(deoxythymidine monophosphate, dTMP),dTMP进一步在细胞内代谢为三磷酸胸嘧啶,三磷酸胸嘧啶为DNA合成和修复的基本原料,因此,TS是dTMP从头合成的限速酶,在DNA合成与修复、细胞增殖与分化中起非常重要的作用 [
虽然研究的数据表明生物标记物表达水平不同,将直接影响到相关药物的疗效,根据基因表达的效果而选择对应的药物,从而达到更佳的治疗目的,但是,大多数均为回顾性的研究,少数为前瞻性研究。就目前的研究结果并不能作为临床常规诊疗的标准,因此大家更广泛的接受以病理类型、临床分期决定患者的治疗方案。不同的个体对化疗的敏感性存在较大差异,这种差异使得在面对不同的患者而选择不同的方法,个体化的治疗越来越凸显,因此,针对分子标志物表达的不同及耐药的关系而选择个体化治疗,从而避免过度治疗或治疗不够,将仍然是NSCLC研究的重要内容之一。
温州市科技计划项目(Y20160245)。
朱林佳,上官宗校,慈 晓,原少斐,赵仁国. TTF-1及TS在肺腺癌中的表达及与培美曲塞化疗疗效相关性分析Relationship between Expression of TTF-1, TS and Chemotherapy Effect of Pemetrexed in Advanced Lung Adenocarcinoma[J]. 世界肿瘤研究, 2018, 08(01): 18-25. http://dx.doi.org/10.12677/WJCR.2018.81004