目的:研究小檗碱抑制幽门螺旋杆菌增殖的作用及其机制,为胃炎的治疗提供新的实验依据。方法:采用药物浓度递增法测定小檗碱对幽门螺杆菌的最小抑菌浓度(MIC)和小檗碱联合甲硝唑、克拉霉素等药物不同浓度对幽门螺杆菌的抑制作用,寻找其MIC。结果:成功测得幽门螺杆菌26,695菌株、Ss1菌株和11,637菌株对小檗碱的MIC分别是32 μg/ml、32 μg/ml和8 μg/ml,联合抑菌:幽门螺杆菌26,695菌株、Ss1菌株和11,637菌株的MIC分别为小檗碱16 μg/ml联合甲硝唑4 μg/ml、小檗碱8 μg/ml联合甲硝唑4 μg/ml和小檗碱4 μg/ml联合甲硝唑2 μg/ml,结论:小檗碱能成功抑制幽门螺杆菌的增殖,联合耐药抑菌增殖明显。 Objective: To study the inhibitory effect of berberine on the proliferation of Helicobacter pylori and its mechanism, so as to provide a new experimental basis for the treatment of gastritis. Methods: The minimal inhibitory concentration (MIC) of berberine against Helicobacter pylori and the inhibitory effect of berberine combined with metronidazole and clarithromycin at different concentrations on Helicobacter pylori were determined by incremental concentration method. Results: The MIC of Helicobacter pylori strains 26,695, S1 and 11,637 against berberine were 32 μg/ml, 32 μg/ml and 8 μg/ml, respectively. Combined bacteriostasis: MIC of Helicobacter pylori strain 26,695, strain Ss1 and strain 11,637 were berberine 16 μg/ml combined with metronidazole 4 μg/ml, berberine 8 μg/ml combined with metronidazole 4 μg/ml, and berberine 4 μg/ml combined with metronidazole 2 μg/ml, respectively. Conclusion: Berberine can successfully inhibit the proliferation of Helicobacter pylori , and the combination of drug resistance and bacteriostasis is obvious.
李 敬1,李 森1,李树林1,刘春霄1,李家仪1,王红艳2*,梁淑娟3
1潍坊医学院临床医学院,山东 潍坊
2潍坊医学院病原生物学教研室,山东 潍坊
3山东省高校免疫学重点实验室,山东 潍坊
收稿日期:2018年12月28日;录用日期:2019年1月11日;发布日期:2019年1月18日
目的:研究小檗碱抑制幽门螺旋杆菌增殖的作用及其机制,为胃炎的治疗提供新的实验依据。方法:采用药物浓度递增法测定小檗碱对幽门螺杆菌的最小抑菌浓度(MIC)和小檗碱联合甲硝唑、克拉霉素等药物不同浓度对幽门螺杆菌的抑制作用,寻找其MIC。结果:成功测得幽门螺杆菌26,695菌株、Ss1菌株和11,637菌株对小檗碱的MIC分别是32 μg/ml、32 μg/ml和8 μg/ml,联合抑菌:幽门螺杆菌26,695菌株、Ss1菌株和11,637菌株的MIC分别为小檗碱16 μg/ml联合甲硝唑4 μg/ml、小檗碱8 μg/ml联合甲硝唑4 μg/ml和小檗碱4 μg/ml联合甲硝唑2 μg/ml,结论:小檗碱能成功抑制幽门螺杆菌的增殖,联合耐药抑菌增殖明显。
关键词 :小檗碱,联合抑菌,最小抑菌浓度
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小檗碱 [
本实验研究小檗碱与临床胃炎常用药物甲硝唑、克拉霉素等联合应用对幽门螺杆菌的作用,探讨幽门螺杆菌耐药性的防御策略,为胃炎疾病的治疗提供新的实验依据。课题组前期研究发现黄连素主要成分小檗碱体外有明显抑制幽门螺杆菌增殖的作用,本课题以此为依据比较小檗碱与临床胃炎常用药物甲硝唑、克拉霉素等联合应用对幽门螺杆菌的作用,探讨幽门螺杆菌耐药性的防御策略,为胃炎疾病的治疗提供新的理论依据。
幽门螺杆菌:26,695菌株、Ss1菌株、11,637菌株均来自于本实验室。小檗碱、甲硝唑、克拉霉素购自中国药品生物制品检定所。新生牛血清购自杭州四季青生物工程材料有限公司。布氏肉汤培养基及布氏肉汤 + 10%蛋黄固体培养基由本实验室制成。
于细菌培养瓶中加入9 ml布氏肉汤培养基 + 1 ml新生牛血清,接种处于生长对数期的菌液20 μl,将培养瓶置于含有5% O2 10% CO2 85% N2的混合气体的细菌罐中,摇床恒温37℃振荡培养。
培养幽门螺杆菌,将处于生长对数期的幽门螺杆菌中加入小檗碱观察0.25 μg/ml、0.5 μg/ml、1 μg/ml、2 μg/ml、4 μg/ml、8 μg/ml、16 μg/ml、32 μg/ml、64 μg/ml、128 μg/ml浓度对幽门螺杆菌的抑制作用。由于培养基为黄色,肉眼无法观察结果,将培养至72 h的菌液取100 μl涂于固体培养基上,置于含有5% O2 10% CO2 85% N2的混合气体的细菌罐中观察,以第一个出现细菌未生长或生长出稀疏单菌落的浓度为最小抑菌浓度。采用相同方法测定甲硝唑、克拉霉素的最小抑菌浓度。
联合应用小檗碱与甲硝唑、克拉霉素等,观察联合用药后,几种常用药物的抑菌情况,方法同2.2.2。
按照2.2.2种方法测得幽门螺杆菌26695菌株、Ss1菌株和11637菌株对小檗碱的MIC。结果见表1。
细菌 MIC μg/ml | 26,695 | Ss1 | 11,637 |
---|---|---|---|
小檗碱 | 32 | 32 | 8 |
甲硝唑 | 8 | 8 | 4 |
表1. 三种菌株对小檗碱、甲硝唑和克拉霉素的最小抑菌浓度,因克拉霉素浓度很小时也杀灭细菌所以未得其最小抑菌浓度
按照2.2.2种方法测得幽门螺杆菌26695菌株、Ss1菌株和11637菌株的MIC分别为小檗碱16 μg/ml联合甲硝唑4 μg/ml、小檗碱8 μg/ml联合甲硝唑4 μg/ml和小檗碱4 μg/ml联合甲硝唑2 μg/ml。
幽门螺杆菌自发现以来,已有大量证据已经证实幽门螺杆菌感染是多种胃肠道疾病的重要病因之一。目前采用多种抗生素联合来治疗幽门螺杆菌感染是最主要的方法,虽然能够达到比较理想的疗效,但是联合的抗生素越多,耐药菌株及副作用的发生频率也越来越高 [
山东省医药卫生科技发展计划项目(2017ws246),潍坊医学院大学生科技创新基金项目(KX2014027),潍坊医学院大学生科技创新基金项目(201810438018)。
李 敬,李 森,李树林,刘春霄,李家仪,王红艳,梁淑娟. 小檗碱抑制幽门螺旋杆菌增殖的作用相关研究 Study on the Effect of Berberine on the Proliferation of Helicobacter pylori[J]. 生物医学, 2019, 09(01): 30-33. https://doi.org/10.12677/HJBM.2019.91005