目的:本研究是为了探讨长链非编码RNA (LncRNA) CRNDE在肾母细胞瘤中的表达以及它的预后意义。方法:通过实时荧光定量PCR技术检测CRNDE在肾母细胞瘤组织中的表达水平;采用卡方检验确定CRNDE表达与肾母细胞瘤患者临床病理指标的相关性。最后利用Kaplan-Meier曲线、对数秩检验和Cox分析阐明CRNDE在肾母细胞瘤中的临床意义。结果:肿瘤组织中的CRNDE表达水平较癌旁组织高;CRNDE表达水平的高低与临床分期、病理分型以及有无淋巴结转移相关。CRNDE的过度表达可作为肾母细胞瘤患者预后不良的独立预测因子。结论:CRNDE在肾母细胞瘤组织中高表达,高CRNDE表达的患者预后不良,提示我们CRNDE可能是肾母细胞瘤患者相关预后/治疗的潜在靶点。关于肾母细胞瘤中CRNDE的意义需要更多的研究深入探讨。 Objective: The aim of this study was to investigate the expression and prognostic significance of the long non-coding RNA (LncRNA) CRNDE in Wilms tumor. Methods: First, we detect the expression level of CRNDE in Wilms tumor tissues by real-time quantitative reverse transcription polymerase chain reaction. Then determine correlation between CRNDE expression and clinicopathological pa-rameters of patients with Wilms tumor by chi-square test. Finally, we use Kaplan-Meier curve, log-rank test and Cox analysis to clarify the clinical significance of CRNDE in Wilms tumor. Results: The expression of CRNDE was increased in patients with Wilms tumor, and the expression level was related to the clinical stage, pathological type and lymph node metastasis. Meanwhile, the overex-pression of CRNDE can be used as an independent predictor of the prognosis of patients with Wilms tumor. Conclusion: CRNDE is highly expressed in Wilms tumor tissues, and patients with high CRNDE expression have poor prognosis, suggesting that CRNDE may be a potential prognos-tic/therapeutic target for Wilms tumor patients. More studies are needed to explore the signifi-cance of CRNDE in Wilms tumor.
目的:本研究是为了探讨长链非编码RNA (LncRNA) CRNDE在肾母细胞瘤中的表达以及它的预后意义。方法:通过实时荧光定量PCR技术检测CRNDE在肾母细胞瘤组织中的表达水平;采用卡方检验确定CRNDE表达与肾母细胞瘤患者临床病理指标的相关性。最后利用Kaplan-Meier曲线、对数秩检验和Cox分析阐明CRNDE在肾母细胞瘤中的临床意义。结果:肿瘤组织中的CRNDE表达水平较癌旁组织高;CRNDE表达水平的高低与临床分期、病理分型以及有无淋巴结转移相关。CRNDE的过度表达可作为肾母细胞瘤患者预后不良的独立预测因子。结论:CRNDE在肾母细胞瘤组织中高表达,高CRNDE表达的患者预后不良,提示我们CRNDE可能是肾母细胞瘤患者相关预后/治疗的潜在靶点。关于肾母细胞瘤中CRNDE的意义需要更多的研究深入探讨。
肾母细胞瘤,长链非编码RNA,CRNDE,表达水平,预后
Yanxin Lu1, Miao Bao1, Yiran Huyan1, Zhenjiang Li2, Yanting Zhu2*
1Xi’an Medical University, Xi’an Shaanxi
2Kidney Disease and Dialysis Center, Shaanxi Provincial People’s Hospital, Xi’an Shaanxi
Received: Dec. 28th, 2022; accepted: Jan. 21st, 2023; published: Jan. 31st, 2023
Objective: The aim of this study was to investigate the expression and prognostic significance of the long non-coding RNA (LncRNA) CRNDE in Wilms tumor. Methods: First, we detect the expression level of CRNDE in Wilms tumor tissues by real-time quantitative reverse transcription polymerase chain reaction. Then determine correlation between CRNDE expression and clinicopathological parameters of patients with Wilms tumor by chi-square test. Finally, we use Kaplan-Meier curve, log-rank test and Cox analysis to clarify the clinical significance of CRNDE in Wilms tumor. Results: The expression of CRNDE was increased in patients with Wilms tumor, and the expression level was related to the clinical stage, pathological type and lymph node metastasis. Meanwhile, the overexpression of CRNDE can be used as an independent predictor of the prognosis of patients with Wilms tumor. Conclusion: CRNDE is highly expressed in Wilms tumor tissues, and patients with high CRNDE expression have poor prognosis, suggesting that CRNDE may be a potential prognostic/therapeutic target for Wilms tumor patients. More studies are needed to explore the significance of CRNDE in Wilms tumor.
Keywords:Wilms Tumor, Long Non-Coding RNA, CRNDE, Expression Level, Prognosis
Copyright © 2023 by author(s) and Hans Publishers Inc.
This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY 4.0).
http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
肾母细胞瘤又称肾胚胎瘤或Wilms瘤,是小儿泌尿系统最常见的恶性肿瘤,起源于肾囊胚细胞,约占儿童肾脏肿瘤的90%和所有儿童癌症的7% [
长链非编码RNA (long nocoding RNA, lncRNAs)是指长度大于200 nt且无蛋白质编码潜能的RNA转录本,由于具有调节肿瘤进展和肿瘤生物学行为(如基因表达,细胞增殖,细胞分化,免疫反应和凋亡)等重要作用,它与癌症之间的关系越来越得到重视 [
从陕西省人民医院泌尿外科在2014年5月至2016年5月间收治的肾母细胞瘤患者中选取64例,包括34例男性,30例女性;患者年龄0.8~6.5岁,平均年龄(3.6 ± 0.8)岁。手术留取患者肿瘤组织和癌旁组织(肿瘤未侵犯)作为研究材料,存储在−80℃下供使用。患者纳入标准:① 肾母细胞瘤的诊断经影像学检查确认;② 既往无其他癌症病史者。这项调查得到了陕西省人民医院伦理委员会的批准(批件编号:20140508),且与《世界医学协会赫尔辛基宣言》相符。在研究之前,所有患者的法定监护人都已获得知情同意。
采用Trizol法提取手术中获得的肾母细胞瘤组织和癌旁组织的总RNA,并用紫外分光光度计评估RNA提取的纯度:测定标本组织在波长为260 nm/280 nm处的吸光度值(OD值),选取OD值范围为1.9~2.0的样品。之后按照反转录试剂盒操作说明将总RNA反转录合成cDNA,以cDNA为模板进行RT-PCR反应。反应结束后用2-ΔΔCt法相对定量CRNDE的表达,并以CRNDE表达量的平均数为界,分为高表达组和低表达组。以上实验均重复3次。该过程中使用的引物为:CRNDE 5′-ATATTCAGCCGTGGTCTTTGA‐3′ (正向)和5′-TCTCGTGACAACTGAGGATT‐3′ (反向);GAPDH 5′‐AGGTGGAGGTGTCGCTGTT‐3′ (上游引物)和5′-CCGGGAAACTGTGGCGTGTG‐3′ (下游引物)。GAPDH基因作为基因内对照。
使用GraphPad Prism 8和SPSS22.0对实验所得数据进行统计分析,计量数据以平均数 ± 标准差(x ± s)表示。采用Student t检验对肾母细胞瘤组织与癌旁组织中CRNDE水平进行比较,卡方检验分析肾母细胞瘤患者CRNDE表达情况与临床病理特征之间的关系,其中的临床分期、病理分型都根据NWTS-5分层系统进行划分。生存分析采用Kaplan-Meier方法和log-rank检验,评价总生存率并计算生存率差异。采用单变量和多变量Cox比例危险法分析临床病理变量及CRNDE表达水平与患者生存时间的关系。p值 < 0.05被认为具有统计学意义。
通过RT-qPCR对肾母细胞瘤组织和癌旁无肿瘤侵袭的正常肾组织进行CRNDE的表达水平检测,结果用相对定量的数据显示,统计分析后发现CRNDE在肾母细胞瘤组织中的表达显著高于正常肾组织(肿瘤组织CRNDE表达:2.58 ± 0.22,癌旁正常组织:1.12 ± 0.18,p < 0.01),结果如图1所示。
根据CRNDE表达均值,将64例肾母细胞瘤患者分为低表达组(31例)和高表达组(33例)。对可能影响CRNDE表达水平的临床病理指标进行分析,结果如表1所示,CRNDE的表达水平与肾母细胞瘤临床分期、病理分型、是否有淋巴结转移显著相关,与年龄、性别、肿瘤位置、肿瘤大小、术前是否进行放化疗无明显相关性。
图1. CRNDE在肾母细胞质瘤组织和癌旁正常组织中的表达水平
临床病理特征 | n | CRNDE表达水平 | Х2 | p | |
---|---|---|---|---|---|
低表达组(31) | 高表达组(33) | ||||
年龄 | 0.033 | 0.8561 | |||
<3岁 | 35 | 15 | 20 | ||
≥3岁 | 29 | 14 | 15 | ||
性别 | 0.025 | 0.874 | |||
男 | 34 | 17 | 21 | ||
女 | 30 | 14 | 16 | ||
临床分期 | 12.206 | 0.001 | |||
Ⅰ~Ⅱ期 | 33 | 25 | 8 | ||
Ⅲ~Ⅳ期 | 31 | 10 | 21 | ||
病理分型 | 8.995 | 0.003 | |||
预后良好的组织结构(FH) | 27 | 19 | 8 | ||
预后不良的组织结构(UFH) | 37 | 12 | 25 | ||
淋巴结转移 | 10.392 | 0.001 | |||
有 | 30 | 10 | 20 | ||
无 | 34 | 25 | 9 | ||
肿瘤位置 | 0.277 | 0.599 | |||
左侧 | 31 | 13 | 18 | ||
右侧 | 33 | 16 | 17 | ||
肿瘤大小 | 0.027 | 0.869 | |||
<5 cm | 42 | 20 | 22 | ||
≥5 cm | 22 | 10 | 12 | ||
术前放化疗治疗 | 1.502 | 0.220 | |||
是 | 38 | 16 | 22 | ||
否 | 26 | 15 | 11 |
表1. CRNDE表达水平与肾母细胞瘤患者临床病理指标的相关程度
FH,预后良好的组织结构;UFH,预后不良的组织结构。
使用Kaplan-Meier分析和对数秩检验来评估我们研究中的肾母细胞瘤患者的CRNDE和总生存率之间的相关性,结果显示:CRNDE水平与肾母细胞瘤患者的总体生存率呈负相关(p = 0.04,图2)。可以说明CRNDE表达水平升高与肾母细胞瘤患者整体生存期较差存在显著相关性。
图2. 高CRNDE表达和低CRNDE表达患者的生存时间比较
用单因素变量进一步评估包括CRNDE表达水平在内的临床病理特征在肾母细胞瘤患者临床进展中的预后意义,结果显示临床分期(p = 0.036)、病理分型(p = 0.024)、术前放化疗(p = 0.031)和CRNDE表达(p = 0.026)与肾母细胞瘤患者的不良预后有关(表2)。接下来检测CRNDE高表达是否是肾母细胞瘤患者的独立不良预后因素,根据临床分期、病理分型、术前放化疗和CRNDE的表达情况进行多变量Cox回归模型调整,最后确认CRNDE的高表达是肾母细胞瘤患者预后不良的独立因素。
临床病理特征 | 单因素分析 | 多因素分析 | ||
---|---|---|---|---|
HR (95% CI) | p | HR (95% CI) | p | |
年龄(≥ vs. <岁) | 1.362 (0.771~2.421) | 0.285 | ||
性别(男vs.女) | 1.186 (0.513~2.076) | 0.572 | ||
临床分期(III-IV vs. I-II) | 1.594 (1.063~3.046) | 0.036 | 2.431 (1.455~4.768) | 0.015 |
病理分型(FH vs.UH) | 1.932 (1.086~3.384) | 0.024 | 2.316 (1.218~4.335) | 0.009 |
肿瘤大小(≥5 vs. <5厘米) | 0.689 (0.395~1.542) | 0.337 | ||
肿瘤位置(左侧vs右侧) | 0.461 (0.125~1.580) | 0.226 | ||
淋巴结转移(有 vs.无) | 0.708 (0.289~1.707) | 0.485 | ||
术前放化疗(是vs. 否) | 1.604 (1.022~3.108) | 0.031 | 2.650 (1.432~5.103) | 0.013 |
CRNDE表达(高vs.低) | 1.891 (1.095~3.562) | 0.026 | 2.520 (1.388~5.145) | 0.016 |
表2. 肾母细胞瘤患者各项临床病理指标的单因素和多因素分析表
HR,风险比;CI,置信区间。
lncRNA是一种不能被翻译为蛋白质的RNA分子,最初被认为是错误的转录产物 [
我们的研究证实,CRNDE在肾母细胞瘤中异常高表达,是肿瘤早期诊断的潜在标志物。分析CRNDE的表达水平与患者多项临床病理指标之间的关系发现,肾母细胞瘤的临床分期、病理分型、有无淋巴结转移与CRNDE的表达水平密切相关;年龄、性别、肿瘤大小、肿瘤位置,术前是否进行放化疗与CRNDE的水平并无明显的相关关系。既往研究认为,被发现在肿瘤中高表达的lncRNA分子往往与肿瘤发生发展过程有关,具有抑制或促进肿瘤生长的作用 [
综上所述,CRNDE在肾母细胞瘤组织中高表达且表达水平与临床进展相关;CRNDE的过表达可能是导致肾母细胞瘤患者不良预后的因素。因此可以认为,CRNDE在完善肾母细胞瘤的诊断和治疗方面能够发挥重要的作用,需要进行下一步的研究进行探讨。
所有作者均声明没有利益冲突。
鲁滟新,鲍 苗,呼延逸然,李振江,朱燕亭. LncRNA CRNDE在肾母细胞瘤中的表达及其临床意义Expression and Clinical Significance of Long Non-Coding RNA CRNDE in Wilms Tumor[J]. 临床医学进展, 2023, 13(01): 864-870. https://doi.org/10.12677/ACM.2023.131125