幽门螺杆菌 (Hp) 感染诊断方法很多,各种诊断方法有其各自的特点,但传统 Hp 感染的诊断方法,主要适用于胃 Hp 感染的检测,对口腔 Hp 感染难以做出稳定的检测结果,甚至存在检测盲区。唾液幽门螺杆菌抗原测试板 (HPS) ,是应用胶体金层析式双抗体夹心法技术,采用 Hp 尿素酶单克隆抗体,定性检测人体唾液中相应 Hp 产生的尿素酶,主要应用于口腔 Hp 感染的检测,具有较高的敏感性和特异性,操作简便、快捷,可在实验室外进行检测等特点。 HPS 与 UBT 联合检测,可大致区分口腔 Hp 感染合并胃 Hp 感染、单纯口腔 Hp 感染、单纯胃 Hp 感染,为临床制定更完善的、全新的 Hp 根除方案提供实验诊断依据。 There are number of diagnostic methods detecting Helicobacter pylori ( H. pylori ) infection. Each has their own character, however standard diagnosis technology apply in detecting H. pylori infection of stomach, not suitable for diagnosis of oral infection. For example, C 13 , C 14 UBT test had been utilized as a gold standard for diagnosis of H. pylori infection in stomach more than two decades, however they have blinded zone detecting oral H. pylori infection. A simple noninvasive, new technology, H. pylori saliva antigen test (HPS) to detecting oral infection with a clean view of the line linking oral and stomach H. pylori infection. HPS is a sandwich immunoassay test, which utilizes an unique antibodies to selectively identify H. pylori Urease in saliva. The HPS technology has high sensitivity and specificity. It is very simple procedure of test and the results can be obtained within few minutes. It is suitable for lab use and over the counter. The combination uses of HPS and UBT can classify both oral and stomach infection, or simple oral infection or simple stomach infection. By this technology we can make an revolutionary treatment plan for cure H. pylori infection.
尿素在健康人口腔环境中的平均浓度一般是3~10 mmol∙L−1,可以持续地从唾液和龈沟液中分泌出来,被口腔细菌产生的尿素酶快速水解,生成CO2和NH3[
口腔细菌尿素酶的检测,可以采用经典的pH指示剂法、纳氏试剂显色法、免疫学方法和聚合酶链反应(PCR)检测尿素酶基因法等。
能方便地检测出液态或固态环境中的酸碱pH值变化,是一种定性检测尿素酶活性的实验方法[
尿素酶分解尿素后生成NH3,NH3可与纳氏试剂发生作用,生成棕黄色的碘化双汞铵,从而可以定性地观测到尿素的分解情况[
细菌尿素酶可刺激宿主产生免疫反应,生成IgG、IgA、IgM抗体,传统的血清学试验主要是检测可长期在于血清中的IgG抗体。常用的方法主要有胶乳凝集试验法、酶联免疫吸附法(ELISA)、免疫酶试验、免疫印迹技术等。唾液、尿液等分泌物抗体检测方法,取样简便,其敏感度、特异度与血清学试验相似。唾液尿素酶抗体检测,是用结合在胶乳颗粒或胶体金上的尿素酶抗原检测样本中的尿素酶抗体,利用抗原抗体之间的特异性结合,出现肉眼可见的凝集反应,对尿素酶进行定性检测[
尿素酶抗原检测法的研究临床上尚鲜见报道。2006年俞莹莹等[
由于尿素酶普遍存在于口腔内具有尿素分解活性的细菌中,故可以设计合适的引物,通过PCR[
唾液Hp抗原检测技术,是一种免疫显色的图解化验法。通过应用胶体金层析式双抗体夹心法原理,采用纯化的CagA阳性Hp尿素酶单克隆抗体,定性检测人体唾液中相应Hp产生的尿素酶,从而诊断Hp感染性疾病。唾液Hp抗原测试板,简称HPS测试板,是一种用于检测口腔中CagA阳性Hp尿素酶的新方法[
如受检者的唾液中含有Hp产生的尿素酶,此尿素酶伴随唾液流至胶体金乳胶试纸时,尿素酶可与试纸中的胶体金标记物结合,当此尿素酶与胶体金的结合物继续流至检测带时,此结合物又可与检测带中的尿素酶单克隆抗体(Hp鼠抗体)再次结合,并被截留而聚集在检测带上,通过可目测的胶体金标记,直接观察到一条紫红色线(T线),即为阳性。如受检者的唾液中无Hp产生的尿素酶,检测带上就无尿素酶胶体金结合物与尿素酶单克隆抗体结合的沉淀物被截留,就不会出现紫红色线,即为阴性。未与唾液中Hp尿素酶结合的游离胶体金标记物,则可伴随唾液越过检测带,移动至对照带时与对照带中的羊尿素酶多克隆抗体(羊对鼠抗体)结合,并显示出红色的对照线(C线)。见图1。
HPS是利用纯化的CagA阳性Hp尿素酶单克隆抗体,特异性地识别口腔相应Hp感染时存在于唾液中的尿素酶,其灵敏度达到10 ng/ml,即用于检测的唾液中存在数个Hp产生的尿素酶,就可在15 min左右显示出阳性结果,表明HPS具有较高的敏感度。在实验室中HPS的最低灵敏度,是通过测定Hp尿素酶浓度间接取得的。尿素酶是Hp释放的一种蛋白质,
图1. HPS检测流程示意图:1) 吸样本纸;2) 胶体金乳胶纸;3) T线(检测线——Hp鼠抗体);4) 玻璃纤维膜;5) C线(对照线——羊对鼠抗体);6) 吸水纸;7) 唾液流向
在实验室中测定其浓度是应用牛血淸蛋白技术(BSP),同时通过光透射方法,把同一等级的蛋白质分子大小作为刻度去测定尿素酶的浓度,再在这个尿素酶浓度的刻度下去测定HPS的最低灵敏度。
在口腔中很多细菌都可产生尿素酶,如变形杆菌属(Proteus)、克雷伯菌属(Klebsiella)、牙孢杆菌属(Bacillas)、埃希氏菌属(Escherichia)和螺杆菌属(Helicobacter)等。虽然各种细菌产生的尿素酶都是由α、β亚单位组成,但不同细菌产生的尿素酶,其空间构象各不相同,而且除Hp之外,各种细菌的尿素酶,均位于细胞质中,只有Hp的尿素酶,位于细胞膜上或细胞膜外[
将受检者的唾液收集在标本杯中,用吸管吸取4滴唾液滴入取样杯中,再滴入2滴缓冲液;更换吸管并充分混匀后,吸取3~4滴混合液,滴入测试板的“吸样窗口”中,15 min左右观察结果。如指示窗口中显示T线和C线,说明HPS检测结果呈阳性;如指示窗口中只显示C线未显示T线,说明HPS检测结果呈阴性;如指示窗口T线和C线均未显示,表示检测失败,可更换测试板后再次进行检测。最近投入临床使用的唾液Hp抗原测试笔(HPS测试笔),是HPS测试板的改进型,只需将试笔像口腔用体温表一样放置舌下,即可自动采集唾液标本进行检测,使用更为简便。检测时的注意事项为在测试前1小时内不能刷牙、漱口、进食和饮水。
2009年叶国钦[
最近我们应用13C-UBT、HPS、HPF (唾液幽门螺杆菌鞭毛抗原测试板)、血清Hp-IgG、粪鞭毛抗原同步检测的方法,对一组91例健康体检者进行检测。另一组110例有上消化道症状患者在检测HPS、HPF同期检测13C-UBT、血清Hp-IgG、内镜下胃黏膜RUT、切片染色镜检、Hp培养。两组临床试验的结果显示:1) HPS与HPF比较,2组差异均无统计学意义;13C-UBT阳性组HPS、HPF与血Hp-IgG,13C-UBT阴性组HPS、HPF与血Hp-IgG比较,2组差异也均无统计学意义(均P > 0.05)。依据HPS、HPF检测的阳性结果可判断为口腔Hp感染。2) 粪Hp鞭毛抗原与13C-UBT,RUT、切片染色镜检、Hp培养与13C-UBT检测结果比较差异均无统计学意义;13C-UBT阳性组的粪Hp鞭毛抗原与血清Hp-IgG,RUT、切片染色镜检、Hp培养与血清Hp-IgG检测结果比较差异也均无统计学意义(均P > 0.05);13C-UBT阴性组的粪Hp鞭毛抗原与血清Hp-IgG,RUT、切片染色镜检、Hp培养与血清Hp-IgG 检测结果比较差异均有统计学意义(均P < 0.05)。依据13C-UBT、RUT、切片染色、Hp培养、粪Hp鞭毛抗原检测的阳性结果可以判断为胃内Hp感染。3) HPS、HPF与13C-UBT检测结果,2组差异均有统计学意义(均P < 0.05),提示13C-UBT检测不能正确判断口腔Hp感染[
胃内Hp与口腔中Hp的关系学术界一直存在争议,争议的焦点是在口腔中发现的Hp,是单纯由于含有Hp的胃液反流入口腔,引起一过性在口腔中出现Hp;还是通过口–口、粪–口、胃–口传播进入口腔的Hp,定植于牙菌斑或牙周组织中所致。伦敦大学医学院Allaker等[
口腔存在Hp对胃Hp根除率的影响,Miyabayashi等[
Hp能否定植于口腔中,是国际医学界至今仍存在争议的一大问题[
HPS是近年研制成功并主要用于口腔Hp检测方法,UBT是传统的主要用于胃Hp感染的非侵入性检测方法,RUT已成为侵入性Hp检测方法的首选。目前基层医院胃Hp感染的检测,仍以内镜下胃黏膜RUT为主要方法,为查明口腔Hp感染情况,并避免内镜检查完毕退出时胃内Hp带入口腔影响HPS的检测结果,因此HPS检测需在内镜检查之前先进行,以查明口腔Hp感染情况。两种检验方法同步检测结果可以显示:1) HPS阳性、UBT或RUT阳性,提示口腔和胃都存在Hp感染;2) HPS阳性、UBT或RUT阴性,提示单纯口腔Hp感染;3) HPS阴性、UBT或RUT阳性,提示单纯胃Hp感染;4) HPS阴性、UBT或RUT阴性,提示未受Hp感染。根据以上检测结果,临床医师就可以为胃合并口腔Hp感染者、单纯口腔Hp感染者或单纯胃Hp感染者,制定出更为个体化的Hp根除治疗方案。处理口腔中Hp感染是一个新的课题,比治疗单纯胃内Hp感染要复杂得多。高文等[
目前多数学者认为耐药是Hp根除失败的主要原因,但Hp在口腔内定植,亦应是Hp根除治疗失败另一重要原因。我深信随着Hp研究工作的不断深入,应用于口腔Hp检测的HPS法在临床上逐步推广使用,口腔Hp感染的神秘面纱会被进一步揭开,这一观点终将会得到广大学者和医务工作者所认同。现有的标准PPI三联疗法、经典含铋剂的四联疗法等Hp根除治疗方案,仅仅局限于胃内Hp感染的治疗,它没有涉及到处理口腔Hp感染。因此,除了必须定期监测Hp的耐药率,筛选敏感的抗生素外,诊治口腔中Hp应是提高Hp根除率的关键。Hp根除治为一项系统工程,消化科与口腔科之间应构筑起一座桥梁,两个学科需共同做出努力,才有可能最终提高Hp根除率。
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